炎症条件下毛状样蛋白1促进淋巴细胞与血管内皮细胞的黏附及迁移

发布时间：2020-11-13 21:11

　　 目的:研究毛状样蛋白1(Cotl1)在炎症条件下调节淋巴细胞迁移的分子机制。方法:CRISPR/Cas9敲除小鼠胰岛血管内皮细胞MS1的Cotl1基因;黏附实验比较淋巴细胞与野生细胞株和敲除细胞株在LPS刺激下的黏附能力;RT-PCR及流式细胞术比较野生细胞株和敲除细胞株在LPS刺激下表面黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin的表达情况;Transwell模型比较淋巴细胞在LPS刺激下穿过野生细胞株和敲除细胞株的迁移能力。结果:敲除细胞株Cotl1~(-/-)构建成功;在LPS刺激下,淋巴细胞与野生细胞株MS1的黏附显著高于敲除细胞株Cotl1~(-/-);同时,野生细胞株MS1表面黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin的表达显著高于敲除细胞株Cotl1~(-/-);淋巴细胞穿过野生细胞株MS1的能力显著高于敲除细胞株Cotl1~(-/-)。结论:炎症条件下Cotl1促进淋巴细胞与血管内皮细胞的黏附及迁移。
【部分图文】：

分别采用RT-PCR和流式方法检测了MS1细胞和敲除细胞Cotl1-/-在LPS刺激下黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin的表达情况，结果如图3。在LPS刺激下，ICAM1、VCAM1、P-selectin的表达量均显著升高，且MS1细胞表达的ICAM1、VCAM1、P-selectin要显著高于敲除细胞Cotl1-/-，证明在炎症条件下血管内皮细胞MS1表面的黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin上调表达。2.4 淋巴细胞跨血管内皮细胞的迁移结果

用Transwell方法比较了在LPS刺激下淋巴细胞及亚群穿过MS1细胞和敲除细胞Cotl1-/-的差异，结果如图4。统计结果发现总淋巴细胞穿过MS1细胞的比例显著高于敲除细胞Cotl1-/-，说明Cotl1基因缺失严重影响了淋巴细胞的跨血管内皮细胞迁移。我们同时分析了淋巴细胞不同亚群穿过MS1细胞和敲除细胞Cotl1-/-的迁移情况，发现CD4和CD8 T细胞穿过MS1细胞的比例显著高于敲除细胞Cotl1-/-，而B细胞无显著差异，说明CD4和CD8 T细胞的跨血管内皮细胞迁移受到Cotl1基因的影响。图3 内皮细胞表面黏附分子的检测

内皮细胞表面黏附分子的检测
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本文编号：2882652