脑老化时Nischarin的高表达影响了树突棘的可塑性

发布时间：2020-11-14 02:53

　　 目的:明确Nischarin在脑老化时的表达变化,阐明nischarin的表达改变对树突棘可塑性的影响,探讨影响nischarin表达的可能机制。方法:利用Western blot技术分别检测nischarin在不同年龄大鼠与小鼠的大脑皮层与海马中表达的变化,以及体外不同发育程度的大鼠海马神经元与小鼠海马神经元中表达的变化。免疫荧光技术分别分析nischarin蛋白在不同年龄大鼠脑片中的蛋白表达与定位,以及在体外培养不同时间的大鼠海马神经元中的表达与定位。构建能有效敲减nischarin的shRNA质粒;在原代培养海马神经元中转染shRNA质粒敲减nischarin蛋白后,观察树突棘密度及形态的变化。在原代培养神经元中分别孵育LPS、IL-1β与IL-6,利用western blot技术检测nischarin蛋白的表达变化。结果:Nischarin的表达在大鼠与小鼠的大脑皮层及海马中均随年龄逐渐增加,在2年龄的大鼠中表达最高,其中在海马的表达较16周龄的成年大鼠也有显著增强。Nischarin在体外培养的大鼠与小鼠海马神经元中的表达随培养时间而增加,在培养20天的老化神经元中显著高于13天的神经元。在脑片中nischarin荧光强度随年龄增强,在原代海马神经元中nischarin荧光强度随发育增强。构建的Nischarin-shRNA质粒能有效地敲减nischarin蛋白的表达水平,经转染原代培养海马神经元后,发现椎体神经元的树突棘密度显著地高于对照shRNA组的神经元,且以瘦长型的树突棘密度增加明显,而蕈状和短粗型树突棘无明显改变。LPS、IL-1β和IL-6分别孵育海马神经元后,nischarin的表达较PBS对照组明显增高,差异显著。结论:Nischarin在老年鼠海马中的表达显著增强,抑制nischarin的表达能增加海马椎体神经元树突上的瘦长型树突棘密度,LPS与一些细胞因子能促进nishcarin蛋白表达。推测Nischarin可能参与了脑老化时学习功能的衰退。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R338
【部分图文】：

ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在大鼠大脑皮层与海马中的表达在出生Ｂ（１?ｄａｙ）是最低的，且其表达??水平在发育阶段（７?ｄａｙｓ，?３?ｗｅｅｋｓ，?１６?ｗｅｅｋｓ）随年龄持续增长。年龄为２年的大鼠可??视为老年，图３．１?Ｂ，老年大鼠（２?ｙｅａｒｓ）海马中的ｎｉｓｃｈａｒｉｎ水平较成年同类有显著??增长。说明ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在脑老化时表迖增强。??Ａ??Ｉ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??ｗ??Ｅ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?４ＭＨ?ｍｍ??｜?丨Ｉ＂?＿丨晒?丨丨丨??Ｂ??３?５?＼ｃ＾ｙ／／Ａ?ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?＃??＊?Ｉ?Ｉ?ｃｏｒｔｅｘ?＊??３．０?－?＂??Ｉ?２５：?■??ＩＩ?？?丨Ｔ?＿丄??ｏ．＾?１．５－?￣￣??运！?？?ＸｒＳ霧??ＴＯ?Ｓ?１．０－?Ｔ?Ｔ??１?－：?Ｔ?ｒ１！?Ｉ?Ｉ?ｉ??｜國?Ｉ??１?ｄａｙ?７?ｄａｙｓ?３?ｗｅｅｋｓ?１６?ｗｅｅｋｓ?２?ｙｅａｒｓ??１６??

ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ａｌｌ?ｇｒｏｕｐｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ａｇｅｓ?ｉｎ?ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?ａｎｄ?ｃｏｒｔｅｘ．??Ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｗｅｒｅ?ｓｈｏｗｅｄ?ｂｙ?ｒａｔｉｏｓ?ｏｆ?ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ?ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｎｓｉｔｙ?（ＩＯＤ）?ｏｆ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??ａｎｄ?ａｃｔｉｎ?（ＩＯＤＮｉｓ／ＩＯＤＡｃｔｉｎ）．?Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｗｉｔｈ?ＳＤ．?Ｏｎｅ－ｗａｙ?ＡＮＯＶＡ．?＊，??ｐ?＜?０．０５：?ｖｓ．?１?ｄａｙ，?＃，ｐ?＜?０．０５：?ｖｓ．?１６?ｗｅｅｋｓ，?ｎ＝３．??３．２?Ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在体外培养大鼠海马神经元中的表达随发育逐渐增强??为了进一步验彳王ｎｉｓｃｈａｒｉｎ参与脑老化进程，我们又用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ技术检测体??外培养的大鼠海马神经元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表迗。图３．２中，体外培养的大鼠海马神经??元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表达隨培养时间而增长。体外培养２０天的神经元可视为老化神经??元（２０?ｄａｙｓ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ，?２０?ＤＩＶ）?［２９，３Ｇ］，其?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?的表达较成熟神经元（１３?ＤＩＶ）??及尚未成熟的神经元（６ＤＩＶ）有显著增长；而成熟神经元（１３?ＤＩＶ）中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??的表达较尚未成熟的神经元（６?ＤＩＶ）也有显著增长。这进一步说明ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在脑??老化时表达增强。??

Ｆｉｇ．３．７．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｓｈＲＮＡ??Ａ．?ＧＦＰ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ－ｓｈＲＮＡ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ．?Ｂ．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｓｐｉｎｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｎｅｕｒｏｎ?ｉｎ?ｆｉｇｕｒｅ?Ａ．?Ｃ．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｗａｓ?ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ?ｗｉｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｙｐｅｓ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｃｏｌｕｍｎ?ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｔｈｉｎ?ｓｐｉｎｅ?ａｎｔｏｔａｌ?ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ａｒｅ?ｈｉｇｈｅｒ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ－ｓｈＲＮｔｈａｎ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ．?Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｗｉｔｈ?ＳＤ．?ｐ?＜?０．０１：?ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ，?ｎ＝２０．??３．８?ＬＰＳ与细胞因子促进海马神经元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表达??２５??
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 Yue-min Ding;Yu-ying Li;Chu Wang;Hao Huang;Chen-chen Zheng;Shao-han Huang;Yang Xuan;Xiao-yi Sun;Xiong Zhang;;Nischarin-siRNA delivered by polyethyleniminealginate nanoparticles accelerates motor function recovery after spinal cord injury[J];Neural Regeneration Research;2017年10期

2 王彦永;耿媛;王培芝;王铭维;;常态脑老化认知功能障碍及相关代谢机制研究进展[J];医学与哲学(B);2014年04期

本文编号：2882984