PPARγ通过对RUVBL2表达调控影响脂联素分泌的研究

发布时间：2017-04-07 16:17

  本文关键词：PPARγ通过对RUVBL2表达调控影响脂联素分泌的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：脂联素是近来发现的一种重要的脂肪细胞因子,在调节脂质和葡萄糖代谢方面扮演着重要角色。它可刺激脂肪酸氧化、抑制肝糖原异生和增强胰岛素敏感性。同时在慢性炎症病理调节、抗动脉粥样硬化及通过神经系统调节进食和体重等功能调控方面也不断地有新的发现。目前,关于脂联素的转录水平调控和翻译后修饰的报道较多,但对RUVBL2调控脂联素分泌的研究未见报道。本文旨在通过研究囊泡融合相关蛋白RUVBL2的转录调控来研究脂联素分泌的后期调控过程,以期从囊泡融合调控的角度来解释肥胖个体血液中脂联素水平减少的现象。本文主要以前体脂肪细胞系3T3-L1以及HEK293细胞系为研究模型。利用实时定量PCR、染色质免疫共沉淀、细胞转染等方法探讨了PPARγ通过调控RUVBL2的表达从而调控脂联素囊泡转运改变脂联素胞外分泌的机制。研究结果如下:1.通过实时定量PCR以及蛋白质免疫印迹法检测成脂分化前体脂肪细胞,发现PPARγ和RUVBL2在成脂分化过程中时间表达顺序一致。2.生物信息学预测RUVBL2启动子区的PPRE作用位点,利用细胞共转染、双荧光素酶报告系统以及染色质免疫共沉淀确定PPARγ结合的具体区域并促进RUVBL2表达。3.通过基因敲减、抑制剂刺激分析发现RUVBL2的水平降低可下调脂联素的分泌,而且PPARγ水平的下调也会降低胞内RUVBL2水平及脂联素的分泌。4.利用基因超表达实验发现,RUVBL2的水平上调可促进脂联素的分泌,PPARγ水平上调也会增加脂联素胞外的分泌。
【关键词】：脂联素 脂肪细胞 Ruvb样蛋白2 过氧化物酶体增殖活化受体
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 缩略语表10-11
• 1 前言11-23
• 1.1 脂肪组织及脂肪细胞分化调控11-14
• 1.1.1 脂肪组织11
• 1.1.2 脂肪细胞因子11-12
• 1.1.3 脂肪细胞分化过程的基因调控12-14
• 1.1.4 肥胖与代谢综合症14
• 1.2 PPARγ 的结构与功能14-16
• 1.2.1 PPARγ 的结构14-15
• 1.2.2 PPARγ 的功能及生物学特性15-16
• 1.3 脂联素的结构与功能16-18
• 1.3.1 脂联素的结构16-18
• 1.3.2 脂联素的功能18
• 1.4 RUVBL2 蛋白的结构与功能18-21
• 1.4.1 RUVBL2 的结构18-20
• 1.4.2 RUVBL2 的功能及研究进展20-21
• 1.5 研究目的与意义21-23
• 2 材料与方法23-36
• 2.1 实验材料23-24
• 2.1.1 细胞系23
• 2.1.2 实验小鼠23
• 2.1.3 载体、菌株及感受态23
• 2.1.4 主要试剂23-24
• 2.2 主要仪器24-25
• 2.3 分子生物学软件及相关网站25
• 2.4 实验方法25-36
• 2.4.1 细胞培养及转染25-27
• 2.4.2 目的片段的扩增、纯化与载体构建27-30
• 2.4.3 RUVBL2 启动子区域PPARγ 位点的预测30
• 2.4.4 双荧光素酶报告系统检测30-31
• 2.4.5 染色质免疫共沉淀（Ch IP）31-32
• 2.4.6 实时定量PCR32-33
• 2.4.7 RNA的提取33-34
• 2.4.8 反转录34
• 2.4.9 Western Blotting34-35
• 2.4.10 数据统计分析35-36
• 3 结果与分析36-50
• 3.1 RUVBL2 的组织表达谱36
• 3.2 3T3-L1 成脂分化过程中PPARγ 和RUVBL2 的表达36-38
• 3.2.1 PPARγ 和RUVBL2 的mRNA水平变化36-37
• 3.2.2 3T3-L1 成脂分化过程中PPARγ 和RUVBL2 蛋白表达变化37-38
• 3.3 PPARγ 对RUVBL2 启动子的调控38-44
• 3.3.1 RUVBL2 启动子顺式元件的分析及启动子的克隆38-40
• 3.3.2 PPARγ 上调RUVBL2 启动子活性40
• 3.3.3 PPARγ 对RUVBL2 突变启动子的影响40-42
• 3.3.4 PPARγ 与RUVBL2 启动子特异性的结合42-43
• 3.3.5 RUVBL2 启动子上PPRE元件保守位点的分析43-44
• 3.4 RUVBL2 敲减以及 PPARγ 激动剂/抑制剂对脂联素分泌的影响44-46
• 3.4.1 RUVBL2 敲减脂联素分泌的影响44-45
• 3.4.2 PPARγ 激动剂/抑制剂对脂联素分泌的影响45-46
• 3.5 RUVBL2 以及 PPARγ 超表达对脂联素分泌的影响46-50
• 3.5.1 稳定转染脂联素基因HEK293 细胞的检测46
• 3.5.2 RUVBL2 超表达对脂联素分泌的影响46-48
• 3.5.3 PPARγ 超表达对脂联素分泌的影响48-50
• 4 讨论50-52
• 5 结论与创新点52-53
• 5.1 结论52
• 5.2 创新点52-53
• 参考文献53-58
• 致谢58

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 任黔川;彭芝兰;谭欣;;PPARγ在卵巢浆液性囊腺癌中的表达[J];重庆医学;2009年23期

2 张乾勇;PPAR的结构与功能及其生物学作用[J];国外医学(卫生学分册);2000年05期

3 白玉杰,牛丹,赵锦荣,张文红,吕贯廷,阎小君;Rapid detection of PPAR_γ gene Pro12Ala polymorphism with fluorescence polarization in Chinese population[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2003年03期

4 袁平戈;PPARα的主要功能是什么[J];中华肝脏病杂志;2003年05期

5 潘光栋;PPAR-γ及其配体在人体细胞的分子研究[J];职业卫生与病伤;2003年02期

6 曹廷兵,叶治家,彭家和,巩燕,黄刚;人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化[J];第三军医大学学报;2004年01期

7 王刚,陈继俊,倪沛洲;PPARα受体亚型与新药研究[J];药学进展;2004年01期

8 叶平;过氧化体增殖物激活型受体(PPAR)与心血管疾病[J];中华心血管病杂志;2004年07期

9 孙曙光,周智广;PPARγ与1型糖尿病[J];国外医学.内分泌学分册;2005年02期

10 胡桂芳,武革;PPARγ与2型糖尿病大血管病变的研究进展[J];广东医学院学报;2005年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 ;Genetic polymorphisms of PPAR-γ,HHEX,PTPRD,KCNQ1,and SRR affect therapeutic efficacy of Pioglitazone in Chinese Patients with type 2 diabetes[A];传承与发展，创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年

2 ;Dynamic analysis and ligand binding affinity investigation of PPAR mutations[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年

3 童南伟;;过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)a与脂质代谢[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年

4 王伟铭;章慧娣;刘峰;陈佳韵;陈楠;;PPARγ活化对肾间质成纤维细胞的作用研究[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

5 陈刚;林新富;梁继兴;林丽香;沈晓丽;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性与老年男性骨质疏松症相关性研究[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年

6 陈刚;林新富;梁继兴;林丽香;沈晓丽;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性与老年男性骨质疏松症相关性研究[A];2008中国医师协会内分泌代谢科医师分会年会论文汇编[C];2008年

7 李洁;戴爱国;胡瑞成;朱黎明;王梅芳;;PPARγ影响γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表达在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

8 管又飞;;脂质过氧化物体增殖物激活受体γ(PPAR γ)与糖尿病肾病[A];中华医学会肾脏学分会2004年年会暨第二届全国中青年肾脏病学术会议专题讲座汇编[C];2004年

9 孙莉;尚进林;梁浩;程焱;;PPAR全激动剂对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

10 ;Endothelial PPARγmediates anti-inflammatory actions of rosiglitazone through dissociation of NF-κB[A];中国生理学会心血管生理学术研讨会论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 徐铮奎;发现PPAR拮抗剂[N];医药经济报;2012年

2 曾凡新邋林敏;PPAR激动剂类抗糖尿病药研发喜忧参半[N];中国医药报;2007年

3 袁松范;开发PPAR多通道激动剂须谨慎[N];中国医药报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘炳婷;SUMO特异性蛋白酶1调控脂肪形成的作用及分子机制[D];上海交通大学;2014年

2 陈宏;巨噬细胞PPARγ对皮肤伤口愈合的作用研究[D];第三军医大学;2015年

3 王伶;高静水压刺激对血小板活化的影响及PPARγ的保护作用的研究[D];南昌大学;2008年

4 孙晶;PPARγ1对系膜细胞外基质生成的抑制作用及其机制[D];复旦大学;2004年

5 邱龙新;醛糖还原酶通过调控肝代谢性核受体PPARα的磷酸化及活性影响脂质稳态[D];厦门大学;2009年

6 杨策;PPARγ基因沉默对细胞炎症反应的调控作用[D];第三军医大学;2005年

7 周波;PPAR β/δ对热预处理血管内皮细胞抗氧化损伤的保护作用及机制研究[D];中南大学;2012年

8 丁乃峥;PPARδ在大鼠和小鼠早期妊娠子宫中的表达与调节[D];东北农业大学;2002年

9 杨晓波;PPARβ与MMP-9参与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的机制研究[D];重庆医科大学;2014年

10 周吉银;小檗碱降糖调脂作用与PPARs/P-TEFb信号转导通路的关系[D];第三军医大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 曹智丽;过氧化物酶增殖物激活受体α（PPARα）在大鼠酒精性肝病发生过程中的变化[D];河北医科大学;2015年

2 宋石;miR-27a通过靶向调控PPARγ对酒精诱导大鼠BMSC分化的影响[D];郑州大学;2015年

3 邹佳楠;PPAR-γ在IgA肾病发生中的作用及其机理研究[D];复旦大学;2014年

4 陶晓燕;PPAR δ激动剂和siRNA对大鼠骨髓基质干细胞及成骨细胞分化和矿化的作用研究[D];安徽医科大学;2015年

5 于飞;新型PPARγ激动剂对人肾癌细胞增殖抑制及其机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

6 何修界;PPARγ激活对GDM小鼠胎盘脂肪酸运输蛋白表达水平的影响[D];安徽医科大学;2015年

7 魏璇;PPARγ通过对RUVBL2表达调控影响脂联素分泌的研究[D];华中农业大学;2015年

8 游洁冰;PPARγ激动剂、胰岛素通过上调负性炎性因子TIPE2的表达抑制高糖、Aβ1-40引起的炎性反应及神经细胞调亡[D];山东大学;2015年

9 刘常为;CTGF、COL-I、PPARγ在卵巢细胞外基质的表达及与多囊卵巢综合征的关系[D];暨南大学;2015年

10 曹小洁;TLR4通过PPARγ下调ABCG1表达促进血管平滑肌细胞内炎症反应及脂质沉积[D];第三军医大学;2015年

  本文关键词：PPARγ通过对RUVBL2表达调控影响脂联素分泌的研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：290832