重组结核杆菌热休克蛋白10对骨代谢平衡分子机制影响的研究
发布时间：2020-12-19 11:28
目的：采用成骨细胞及破骨细胞培养体系，探索结核杆菌热休克蛋白10（Mtcpn10）是否通过参与成骨细胞增殖和破骨细胞生成，从而影响骨关节结核患者局部骨代谢平衡的分子机制，为骨结核骨质破坏基因治疗寻找新的治疗靶点。方法：1)建立体外人成骨细胞及破骨细胞培养体系：使用髂骨块体外培养获取成骨细胞，通过显微镜下细胞形态出现钙结节及碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测定对其鉴定。破骨细胞通过外周静脉血单个核细胞，用含RANKL和M-CSF的α-MEM培养液重悬后接种在含有骨膜片和盖玻片孔板上，培养21d后获得获得破骨细胞，通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色和瑞氏-吉姆萨染色进行细胞形态鉴定，通过甲苯胺兰染色及电镜观察鉴定骨陷窝的形成；2)以10μg/mL、1μg/mL及0.1μg/mL不同浓度的r-Mtcpn10作用于上述体外培养的成骨细胞，观察成骨细胞的增殖、细胞周期、碱性磷酸酶活性及钙结节形成情况。应用Realtime-PCR方法检测成骨细胞OPGmRNA及RANKL mRNA，并用Western-blot免疫印迹法检测OPG及RANKL蛋白表达情况；3)以1μg/mL、0.1μg/mL及0.01μg/...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：174 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
人成骨细胞生长曲线
钙离子浓度检测结果表 1-2 实验组与对照组钙离子浓度结果比较1-2 Comparison of the calciumion concentration between the experimental grcontrol group分组 n 钙离子浓度（mmo（RANKL+M-CSF） 6 0.190±0.036对照组 6 0.023±0.010照组比较*P＜0.05
图 2-1 电泳图Figure2-1 Electrophoresis picture综合 RNA 浓度表及电泳图，这些 RNA 的质量满足荧光定量 PCR 实验的要反转录一聚合酶链反应的引物设计：根据 Genebank 设计核因子 κB 受体活配体、护骨素和内参 3 对基因的引物、委托上海生工生物工程公司合成见表 表 2-2 引物序列Table 2-2 Primer sequencesene Length Upstream sequence Downstream sequenceNKLGPDH279bp200bp202bp5′-GGAGTTGGCCGCAGACAAGA-3′5′-CCTCTGTGAAAACAGCGTGC-3′5′-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3′5′-TAGAAGAACAGGGCGACGC5′-AGGTGTCTTGGTCGCCATTT5′-CTCCACGACGTACTCAGCG合成引物为冷冻干制品，首次使用离心后加入无菌超纯水 lmL，低速震荡
【参考文献】：
期刊论文
[1]RANKL,a necessary chance for clinical application to osteoporosis and cancer-related bone diseases[J]. Hisataka Yasuda. World Journal of Orthopedics. 2013(04)
[2]Historically significant events in the discovery of RANK/RANKL/OPG[J]. T John Martin. World Journal of Orthopedics. 2013(04)
[3]成骨细胞与破骨细胞共培养及其应用研究进展[J]. 廖乃顺,陈文列,黄云梅,陈赛楠. 中国骨伤. 2013(04)
[4]Osteoclast fusion and regulation by RANKL-dependent and independent factors[J]. Lianping Xing,Yan Xiu,Brendan F Boyce. World Journal of Orthopedics. 2012(12)
[5]OPG/RANKL/RANK系统在成骨细胞和破骨细胞相互调节中的作用[J]. 仲蕾蕾,杨冰,黄晓斌,孙元明. 中国骨质疏松杂志. 2011(11)
[6]成骨细胞的体外培养与鉴定[J]. 王勇平,廖燚,蒋垚. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(33)
[7]新疆维吾尔自治区骨关节结核与肺结核分枝杆菌培养、菌型分布及耐药特点分析[J]. 魏继虎,李君莲,金格勒,綦迎成,王泉,马瑞瑛,盛伟斌,努尔波力,陈洪涛. 中国全科医学. 2010(27)
[8]人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定[J]. 梅红,李一雷,王心蕊,张丽红,刘巍,王建民,李玉林. 吉林大学学报(医学版). 2007(05)
[9]淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响[J]. 殷晓雪,陈仲强,党耕町,马庆军,刘忠军. 中国中药杂志. 2005(04)
[10]人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其鉴定[J]. 殷晓雪,陈仲强,郭昭庆,马庆军,党耕町. 中国修复重建外科杂志. 2004(02)
本文编号：2925822
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：174 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
人成骨细胞生长曲线
钙离子浓度检测结果表 1-2 实验组与对照组钙离子浓度结果比较1-2 Comparison of the calciumion concentration between the experimental grcontrol group分组 n 钙离子浓度（mmo（RANKL+M-CSF） 6 0.190±0.036对照组 6 0.023±0.010照组比较*P＜0.05
图 2-1 电泳图Figure2-1 Electrophoresis picture综合 RNA 浓度表及电泳图，这些 RNA 的质量满足荧光定量 PCR 实验的要反转录一聚合酶链反应的引物设计：根据 Genebank 设计核因子 κB 受体活配体、护骨素和内参 3 对基因的引物、委托上海生工生物工程公司合成见表 表 2-2 引物序列Table 2-2 Primer sequencesene Length Upstream sequence Downstream sequenceNKLGPDH279bp200bp202bp5′-GGAGTTGGCCGCAGACAAGA-3′5′-CCTCTGTGAAAACAGCGTGC-3′5′-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3′5′-TAGAAGAACAGGGCGACGC5′-AGGTGTCTTGGTCGCCATTT5′-CTCCACGACGTACTCAGCG合成引物为冷冻干制品，首次使用离心后加入无菌超纯水 lmL，低速震荡
【参考文献】：
期刊论文
[1]RANKL,a necessary chance for clinical application to osteoporosis and cancer-related bone diseases[J]. Hisataka Yasuda. World Journal of Orthopedics. 2013(04)
[2]Historically significant events in the discovery of RANK/RANKL/OPG[J]. T John Martin. World Journal of Orthopedics. 2013(04)
[3]成骨细胞与破骨细胞共培养及其应用研究进展[J]. 廖乃顺,陈文列,黄云梅,陈赛楠. 中国骨伤. 2013(04)
[4]Osteoclast fusion and regulation by RANKL-dependent and independent factors[J]. Lianping Xing,Yan Xiu,Brendan F Boyce. World Journal of Orthopedics. 2012(12)
[5]OPG/RANKL/RANK系统在成骨细胞和破骨细胞相互调节中的作用[J]. 仲蕾蕾,杨冰,黄晓斌,孙元明. 中国骨质疏松杂志. 2011(11)
[6]成骨细胞的体外培养与鉴定[J]. 王勇平,廖燚,蒋垚. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(33)
[7]新疆维吾尔自治区骨关节结核与肺结核分枝杆菌培养、菌型分布及耐药特点分析[J]. 魏继虎,李君莲,金格勒,綦迎成,王泉,马瑞瑛,盛伟斌,努尔波力,陈洪涛. 中国全科医学. 2010(27)
[8]人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定[J]. 梅红,李一雷,王心蕊,张丽红,刘巍,王建民,李玉林. 吉林大学学报(医学版). 2007(05)
[9]淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响[J]. 殷晓雪,陈仲强,党耕町,马庆军,刘忠军. 中国中药杂志. 2005(04)
[10]人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其鉴定[J]. 殷晓雪,陈仲强,郭昭庆,马庆军,党耕町. 中国修复重建外科杂志. 2004(02)
本文编号：2925822
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