n-3PUFAs调节小鼠体重及对下丘脑自噬与炎症的影响

发布时间：2020-12-22 12:27

　　目的:以fat-1转基因小鼠为实验模型,研究内源性n-3PUFAs的增加,对小鼠体重、下丘脑炎症因子表达及自噬蛋白表达的影响,并探讨n-3PUFAs控制体重的作用机理。方法:同窝小鼠6周龄时,剪取尾尖提取DNA进行普通PCR基因鉴定后,将小鼠分为两组:fat-1转基因小鼠与野生型小鼠,每组个10只;测定14周龄的小鼠体重与体长,比较体重并根据公式计算Lee’s指数。对小鼠肝脏冰冻切片进行油红O染色,并观察两组小鼠肝脏中的脂滴数量;采用电镜技术观察两组小鼠下丘脑神经元中的自噬小体的数量,初步观察两组小鼠下丘脑自噬强度;对两组小鼠的大脑冰冻切片采用免疫荧光技术将自噬蛋白P62,LC3,ATG7在下丘脑定位;采用western blot技术,对自噬蛋白P62、LC3、ATG7在下丘脑中的表达进行相对定量分析,直接比较两组小鼠下丘脑的自噬强度;采用实时荧光定量PCR,对下丘脑炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-k B,趋化因子MCP-1、CCL5、CXCL12、CX3CL1,小胶质细胞表面标志物TMEM119、星形胶质细胞表面标志物GFAP的m RNA进行相对定量分析;同时采用荧光... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验器材
        1.2 配方及试剂
        1.3 实验动物
        1.4 样本
        1.5 常用软件及数据库
    2 实验方法
        2.1 小鼠体重、体长的测定
        2.2 fat-1转基因小鼠的鉴定
            2.2.1 DNA提取
            2.2.2 普通PCR反应
        2.3 荧光定量PCR
            2.3.1 RNA的提取
            2.3.2 cDNA的合成
            2.3.3 实时荧光定量PCR
        2.4 免疫荧光实验
            2.4.1 冰冻切片制备
            2.4.2 免疫荧光染色
        2.5 肝脏组织油红O染色
            2.5.1 肝脏组织冰冻切片制作
            2.5.2 油红O染色步骤
        2.6 透射电镜检查
        2.7 蛋白印迹Westernblotting
            2.7.1 蛋白样品的制备
            2.7.2 蛋白样品浓度测定
            2.7.3 蛋白变性
            2.7.4 Westernblotting
        2.8 ELISA
        2.9 数据处理
结果
    1 基因鉴定结果
    2 体重与体长测量结果
    3 油红O对肝脏冰冻切片染色结果
    4 下丘脑趋化因子、炎症因子的相对表达量
    5 下丘脑电镜观察自噬小体结果
    6 下丘脑免疫荧光定位自噬蛋白
    7 Westernbloting检测P62、ATG7、LC3Ⅱ/Ⅰ结果分析
    8 外周脂肪组织炎症因子相对表达量
    9 ELISA对外周脂肪组织炎症因子的检测
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]与肥胖相关的慢性炎症机制研究进展[J]. 王楠楠,白英龙.  中国全科医学. 2017(12)
[2]自噬和肥胖[J]. 张林,胡茂清.  中国糖尿病杂志. 2015(04)
[3]肥胖与慢性炎症[J]. 孙波,李辉,王宁.  生物学杂志. 2012(02)
[4]Fat-1基因在n-3多不饱和脂肪酸功能研究中的应用[J]. 武珅,杜卫华,郝海生,王栋,张诺,朱化彬.  中国生物工程杂志. 2008(08)
[5]肥胖相关性肾小球病[J]. 杨霁云.  中华儿科杂志. 2002(04)



本文编号：2931769