人脐血间充质干细胞定向诱导分化为类许旺细胞的生物学特性研究

发布时间：2017-04-12 14:18

  本文关键词：人脐血间充质干细胞定向诱导分化为类许旺细胞的生物学特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:当今社会周围神经损伤的发生率特别高,对于缺损长度超过2cm的损伤目前尚无理想的解决办法,近些年生物工程学的发展和干细胞研究深入开展给神经损伤的治疗带来新希望。种子细胞即许旺细胞一直是研究的“瓶颈”,自体及异体的许旺细胞因其自身的缺点未能得到大规模使用,由干细胞体外诱导而来的类许旺细胞具有广阔的应用前景,如何证明所诱导的类许旺细胞具有许旺细胞的功能至关重要,许旺细胞具有强大的自分泌和旁分泌功能,这可能是其发挥生物学效应的机制之一,因此如能证明所诱导的类许旺细胞可以分泌真正许旺细胞分泌的一些功能性蛋白,则可以为后期的进一步研究提供实验理论依据。目的:分别收集人脐血间充质干细胞、由干细胞诱导分化而来的类许旺细胞以及人引产胎儿来源的许旺细胞的细胞培养上清液,提取其中的蛋白,运用双向电泳技术比较三种细胞的分泌蛋白差异性及相似性,查询相关蛋白的主要功能。方法:按照本课题组之前使用的先用羟乙基淀粉沉淀红细胞,再运用人淋巴细胞分离液离心提取原代间充质干细胞,通过形态学和流式细胞仪测定细胞表面标志物等方法鉴定和测定其纯度,符合要求者进行下一步实验,取第三代干细胞采用本课题组之前优化的诱导方法进行体外人工诱导。采用酶消化法制备人许旺细胞。对三种细胞(间充质干细胞,类许旺细胞,许旺细胞)采用“逐步过度法”过度到无血清培养,收集三种细胞培养上清液,用0.22um滤器过滤去除残留细胞,加入1mM浓度的蛋白酶抑制剂后放入超低温冰箱(-80℃)备用。提取培养液里的分泌蛋白,运用双向电泳和质谱分析技术寻找差异显著蛋白,对间充质干细胞比许旺细胞少的蛋白和类许旺细胞比间充质干细胞多的蛋白进行匹配,查询其蛋白的主要功能。结果:1)2-D凝胶电泳图具有较好的分辨率及重复性,平均每张胶的蛋白表达点有三千左右,匹配率各自是96%、97%、98%。2)诱导前的HUCBMSCs与SCs有397个蛋白差异点,诱导后的类SCs与SCs仅有280个差异蛋白点,说明间充质干细胞诱导为类许旺细胞后在分泌蛋白组学方面更相似于许旺细胞3)对于按照筛选标准筛选出的12个差异蛋白进行质谱鉴定,最终鉴定出7个蛋白(剩下五个因蛋白浓度较低无法成功鉴定出来)4)鉴定出的上述分泌蛋白经查文献得知大部分对神经损伤的修复具有一定的促进作用。结论:1.使用羟乙基淀粉和人淋巴细胞分离液可提取原代的间充质干细胞。2.人脐血间充质干细胞诱导后在分泌蛋白方面更接近真正的许旺细胞。3.本实验成功鉴定出间充质干细胞在诱导分化为类许旺细胞的过程中增加的7个分泌蛋白点,且这些分泌蛋白也是许旺细胞所分泌的。这些分泌蛋白进一步证明了所诱导的类许旺细胞和正常的许旺细胞在分泌蛋白组学方面具有一定的相似性,但同时还存在一定的差距,诱导方案还需要进一步完善。
【关键词】：脐血间充质干细胞 体外诱导分化 分泌蛋白组学 许旺细胞 质谱鉴定
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.28
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 引言9-10
• 第一部分 原代间充质干细胞提取、鉴定、扩增和诱导10-21
• 1.材料与方法10-15
• 2.结果15-19
• 3.讨论19-21
• 第二部分 引产胎儿坐骨神经来源的许旺细胞的体外培养与纯化21-26
• 1.材料与方法21-24
• 2.结果24-25
• 3.讨论25-26
• 第三部分 间充质干细胞、类许旺细胞与许旺细胞三种细胞分泌蛋白组学的比较26-46
• 1.实验材料27
• 2.操作步骤27-36
• 3.结果36-42
• 4.讨论42-46
• 结论46-47
• 参考文献47-49
• 致谢49-50
• 附录50-59
• 附录A 英中文术语和缩略语对照表50-51
• 附录B 个人简历51
• 附录C 已发表论文51
• 附录D 综述51-59
• 参考文献57-59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 林巍;唐雪梅;孔圆;王卉;刘开彦;;CD271及CD133用于阳性分选富集骨髓间充质干细胞的比较[J];中国实验血液学杂志;2008年02期

2 洪坦辉;金羽青;戴传昌;董佳生;祁佐良;王毅敏;刘伟;曹谊林;;复合胶原酶消化法制备高纯度小鼠雪旺细胞[J];组织工程与重建外科杂志;2008年05期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 柳亦松;几种重要的细胞分泌蛋白质组研究[D];湖南师范大学;2010年

  本文关键词：人脐血间充质干细胞定向诱导分化为类许旺细胞的生物学特性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：301456