细粒棘球绦虫不同发育阶段表达谱的差异分析及特异性诊断抗原筛选的研究
本文关键词：细粒棘球绦虫不同发育阶段表达谱的差异分析及特异性诊断抗原筛选的研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:利用生物信息学的方法和技术原理,对细粒棘球绦虫不同发育阶段基因的表达谱进行差异比较和生物学功能分析,找出细粒棘球绦虫原头蚴阶段特有的抗原分子,为筛选包虫病特异性诊断抗原奠定基础。方法:1.细粒棘球绦虫不同发育阶段表达谱的差异分析:对国家人类基因组研究中心(CHGCS)公开发表在http://chgc.sh.cn/Eg的细粒棘球绦虫m RNA测序数据进行差异分析,根据数据库中测得的细粒棘球绦虫不同发育阶段的reads饱和度和RPKM表达丰度,筛选出在六钩蚴阶段不表达而在原头蚴阶段高表达的基因。2.使用uniprot和Softberry Prediction软件对这些基因进行亚细胞学定位,筛选出表达膜蛋白或者胞外分泌蛋白的基因。应用DNA Star、NCBI/BLAST公共数据库和www.Predictprotein.org在线数据库对这些编码膜蛋白或胞外分泌蛋白的基因进行二级结构分析、抗原表位预测和同源性比较分析,进一步缩小范围,找出适合做诊断抗原的分子。3.选择其中的一个分子进行重组表达载体的构建与表达(1)根据所获取的目的片段的序列设计引物,TRIZOL法提取人源细粒棘球绦虫原头蚴的总RNA,采用RT-PCR扩增目的基因;(2)将目基因克隆到p GEM-T载体,转化入大肠杆菌JM109中;(3)将目的基因克隆到p ET-28a表达载体中并转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达重组蛋白,经含Ni2+的His-bind树脂柱纯化,获得纯化的重组蛋白。4.重组蛋白的免疫学特性分析(1)利用重组蛋白免疫动物,获得抗血清;(2)用r EG-01883免疫小鼠得到抗血清,通过ELISA和Western-blot的方法,对该重组蛋白的免疫学特性进行分析与鉴定。5.初步评估该分子对的潜在诊断价值:使用该重组蛋白包被ELISA板,分别使用包虫病人和正常人的血清予以识别,对该重组蛋白的潜在诊断价值进行判断与评估。结果:1.通过差异筛选,从7218个六钩蚴中不表达而原头蚴表达的分子中获得319个原头蚴阶段特异性高表达基因。2.生物信息学方法最终确定了26个编码膜蛋白或胞外分泌蛋白的基因。3.选择其中的一个分子EG-01883成功构建基因工程菌株EG-01883/p ET-28a/BL21(DE3),表达并纯化出分子量约36k D的蛋白。4.ELISA结果显示显示:?用纯化的重组蛋白r EG-01883免疫小鼠,可以诱导产生特异性Ig G抗体;?免疫后血清细胞因子IFN-γ和IL-4的变化水平均较佐剂组与对照组显著升高,差异均具有统计学意义(p0.05),表明该蛋白可刺激小鼠产生强烈免疫应答;?Western blot结果显示,该重组抗原可被His-Tag标签抗体、重组蛋白免疫小鼠血清以及本室保存继发感染血清识别,而不被空白组小鼠血清识别。5.重组蛋白r EG-01883能被包虫病人血清特异性识别,且与正常人血清相比具有显著性差异,(p0.05)。结论:重组蛋白EG-01883具有较好的免疫原性和抗原性,能识别包虫病人血清,有成为临床诊断抗原的潜在价值。
【关键词】：细粒棘球绦虫 生物信息学 诊断抗原 免疫学特性
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.734;R383.33
【目录】：
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-12
- 前言12-15
- 第一部分 细粒棘球绦虫表达谱的差异分析15-24
- 1 材料15
- 2 方法15-17
- 结果17-22
- 讨论22-24
- 第二部分 重组表达载体的构建24-41
- 1 实验材料24-26
- 2 方法26-35
- 结果35-41
- 第三部分 重组蛋白rEG-01883免疫学特性分析41-51
- 1 材料41
- 2 方法41-45
- 结果45-48
- 讨论48-51
- 结论51-52
- 参考文献52-56
- 综述56-68
- 综述参考文献62-68
- 致谢68-69
- 攻读学位期间发表的学术论文69-70
- 个人简历70
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘滋泽;田生珠;忠拉;公保;杨隆寿;杨措;;班玛地区狗绦虫的调查[J];青海畜牧兽医杂志;1985年06期
2 吴笃卿;;英国细粒棘球绦虫的流行病学(之五)——英国细粒棘球绦虫的亚种[J];地方病译丛;1990年01期
3 魏明远;;新南威尔士东南部——狐狸感染细粒棘球绦虫[J];地方病译丛;1990年02期
4 杨发春,鲍东福;犬细粒棘球绦虫的调查[J];中国兽医科技;1990年10期
5 胡惠民;;细粒棘球绦虫形态学观察[J];上海畜牧兽医通讯;1990年06期
6 张文宝,哈斯也提,张状志,齐普生,王文明;细粒棘球绦虫的发育时限观察[J];中国兽医科技;1991年11期
7 杨发春;;犬体内细粒棘球绦虫发育期限试验[J];青海畜牧兽医杂志;1992年02期
8 魏有梅;文进明;;犬感染细粒棘球绦虫调查[J];中国兽医杂志;2006年07期
9 李明忠,R.E.Larsen;吡喹酮抗犬细粒棘球绦虫的效果[J];兽医科技杂志;1981年01期
10 曹岩;;肯尼亚狒狒实验感染驼骆、牛、绵羊、山羊细粒棘球绦虫的研究[J];地方病译丛;1987年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王颖旺;杨光友;蒋忠荣;邓仕金;;细粒棘球绦虫基因型与抗原研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
2 张旭;古努尔·吐尔逊;米晓云;石保新;巫剑;赵莉;阿布力克木;张玲;丁晓玲;阿布力兹;李国庆;卡那提拜克·开比热;张壮志;;抗体夹心ELISA试验检测犬细粒棘球绦虫粪抗原方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
3 张文宝;张壮志;石保新;李军;古丽努尔;由弘;吐尔洪;哈斯也提;王进成;;犬抗细粒棘球绦虫感染的免疫效果初试[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
4 张文宝;张壮志;石宝新;李军;古丽努尔;由弘;吐尔洪;哈斯也提;王进成;;犬抗细粒棘球绦虫感染的免疫效果初试[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
5 石保新;张壮志;王进成;李欣;雒燕;张文宝;;爱普锐克-食肉动物自动吞食片对犬细粒棘球绦虫驱除试验[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
6 李文桂;周必英;;细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠免疫应答的研究[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
7 张亚楼;温浩;马旭东;苗玉清;陈雪鸿;;家犬粪便中的细粒棘球绦虫PCR检测方法的建立[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
8 张文宝;李军;由弘;张壮志;古努尔·吐尔逊;AlexLoukasa;DonaldP.McManusa;;表达细粒棘球绦虫成虫不同发育阶段的基因家族[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
9 巫剑;张壮志;石保新;张文宝;王进成;古努尔;岳城;张旭;;细粒棘球绦虫感染犬及EgM9蛋白免疫犬引起的免疫应答研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
10 米晓云;袁丽英;张壮志;石保新;阿布都;阿依努尔;张玲;阿布里克木;王进成;岳城;张文宝;;细粒棘球绦虫——原头蚴在两种细胞培养液中体外培养[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 记者 胡德荣;我学者破译细粒棘球绦虫基因密码[N];健康报;2013年
2 四川疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所所长 邱东川 记者 陈永杰;城市宠物不易传染“包虫病”[N];北京科技报;2012年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 潘伟;细粒棘球绦虫原头节感染对宿主M-MDSC功能的调控及转录特征研究[D];中国疾病预防控制中心;2014年
2 马秀敏;新疆细粒棘球绦虫基因多态性及实验诊断学研究[D];新疆医科大学;2007年
3 王莹;细粒棘球绦虫排泄分泌抗原免疫学特征及功能研究[D];中国疾病预防控制中心;2012年
4 周必英;细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗构建及其免疫机制研究[D];重庆医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 叶倩;犬细粒棘球绦虫环介导等温扩增（LAMP)诊断方法的建立[D];石河子大学;2015年
2 高富;细粒棘球绦虫重组蛋白P29诱导绵羊的免疫保护力及其免疫机制研究[D];宁夏医科大学;2015年
3 张旭;棘球绦虫检测及棘球蚴病综合防控措施的示范与应用[D];新疆农业大学;2015年
4 高s，
本文编号：302288
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/302288.html
