羟基红花黄色素A对血管性痴呆动物模型保护作用的研究

发布时间：2017-04-13 05:12

  本文关键词：羟基红花黄色素A对血管性痴呆动物模型保护作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：随着我国社会老龄化程度不断的加剧,血管性痴呆(Vascular dementia,VD)已逐步发展成影响国内老年人晚年生活质量的重要疾病之一,其致病因素中最常见的即脑缺血(脑缺血再灌注)。羟基红花黄色素A (Hydroxysafflor yellow A,HSYA)是传统中药红花的主要活性成分之一,中药红花具有活血化瘀的功效,本研究初步探明了HSYA对VD疾病的保护作用的机制,为该药物预防VD的临床应用提供理论依据。方法：实验一：小鼠行以双侧颈总动脉夹闭法造模,术3d后对小鼠进行避暗和跳台试验测试,观察小鼠精神状况、学习记忆能力的改变情况；测试完成后,进行断头取脑,秒表记录下小鼠断头后张口喘息时间,用以评价实验小鼠抗缺氧能力；利用比色法测定小鼠脑组织中总蛋白(TP)、总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、乳酸脱氢酶(LDH)和乳酸(LD),以评价脑缺血再灌注小鼠脑代谢情况；应用常规HE染色法观察造模后小鼠脑组织病理学改变情况。实验二：大鼠行以双侧颈总动脉永久性结扎法造模,术后3d以大鼠避暗和跳台试验结果,观察大鼠学习记忆能力改变情况,用以评价脑缺血造模效果；应用RT-PCR法检测各组脑组织细胞中炎症因子NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP mRNA表达的影响；利用免疫组织化学染色法检测大鼠脑组织细胞中上述炎症因子的蛋白表达情况。结果：实验一发现HSYA对脑组织的缺血性损伤有明显的预防保护作用,能有效改善脑缺血再灌注小鼠的精神状态和学习记忆能力。HSYA能够在小鼠脑缺血再灌注后显著性提升脑组织中SOD活力和降低MDA含量,有效减轻了缺血再灌注后脑组织脂质过氧化的损伤,增强了自由基清除的能力；减少N0的积聚,降低NOS和iNOS的活性,降低了iNOS催导转化生成的神经毒性N0的损伤；极显著性提高LDH的活性,降低了LD的含量,从而降低了细胞膜的损伤,减轻细胞酸中毒的程度。实验二发现HSYA对大鼠脑缺血后具有保护神经细胞作用,大鼠脑缺血后HSYA有效的调控减少了脑组织中NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP四个炎症因子mRNA基因的表达,免疫组化染色从蛋白质水平也证实了HSYA对上述四个炎症因子的抑制作用,从而显示其抗炎作用。作用机制可能是通过下调脑缺血大鼠炎症信号转导途径核转录因子κB调节通路相关因子IL-1β的炎症作用；降低Caspase-12和CHOP的表达,抑制内质网应激作用从而减少大鼠脑组织神经细胞的凋亡。结论：1)HSYA能明显改善血管性痴呆引起的学习记忆能力,对神经元具有较好的保护作用,其改善与保护作用呈现明显的剂量依赖关系：2)HSYA能够减少缺血再灌注小鼠脑组织中有害代谢产物的积聚,增强自由基的清除能力,降低脂质过氧化损伤、细胞膜的损伤,减轻细胞酸中毒的程度；3)HSYA能够显著下调脑组织中NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP四个炎症因子mRNA基因的转录水平和蛋白质的表达情况,表明其具备抗炎作用,能抑制内质网通路,减少神经细胞的凋亡。
【关键词】：羟基红花黄色素A 脑缺血再灌注 脑代谢 炎症因子 神经保护作用
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-15
• 注释说明清单15-17
• 引言17-20
• 1 中药红花抗脑缺血损伤的研究进展20-25
• 1.1 中药红花及药效概述20
• 1.2 中药红花的化学成分20-21
• 1.3 中药红花复方制剂21
• 1.4 中药红花抗脑缺血损伤作用的机制研究现状21-24
• 1.4.1 保护脑组织损伤22-23
• 1.4.2 抗血小板聚集23
• 1.4.3 保护内皮细胞23
• 1.4.4 降低血液粘度23
• 1.4.5 抗动脉粥样硬化作用23-24
• 1.4.6 抗炎作用24
• 1.5 小结24-25
• 2 脑缺血再灌注损伤机制的研究进展25-30
• 2.1 常见脑缺血再灌注动物模型的制备及优缺点对比25-26
• 2.2 脑缺血再灌注机制的研究进展26-29
• 2.2.1 Ca~(2+)超载27
• 2.2.2 兴奋性氨基酸毒性作用27-28
• 2.2.3 炎症反应28
• 2.2.4 自由基损伤28-29
• 2.2.5 一氧化氮损伤29
• 2.2.6 血脑屏障损伤29
• 2.3 小结29-30
• 3 HSYA对脑缺血再灌注小鼠影响的研究30-57
• 3.1 实验材料30
• 3.2 实验用品30-33
• 3.2.1 实验主要药品和试剂的购置30-31
• 3.2.2 主要溶液的配制方法31-32
• 3.2.3 主要仪器32-33
• 3.3 实验方法33-36
• 3.3.1 小鼠双侧颈总动脉夹闭法模型制备方法33
• 3.3.2 10%脑组织匀浆液制备方法33
• 3.3.3 4%多聚甲醛固定小鼠脑组织方法33-34
• 3.3.4 小鼠尾静脉给药方法34
• 3.3.5 小鼠避暗试验方法34-35
• 3.3.6 小鼠跳台试验方法35-36
• 3.4 实验内容36-46
• 3.4.1 HSYA对小鼠精神状态、学习记忆能力影响的测试36
• 3.4.2 HSYA对小鼠抗缺氧能力的测试36
• 3.4.3 HSYA对小鼠脑代谢情况影响的测定36-44
• 3.4.4 常规HE染色观察小鼠脑组织病理学的改变44-46
• 3.5 实验结果46-53
• 3.5.1 造模后小鼠精神状态的改变46
• 3.5.2 HSYA对脑缺血再灌注小鼠学习记忆能力的影响46-47
• 3.5.3 HSYA对脑缺血再灌注小鼠断头抗缺氧生存时间的影响47-48
• 3.5.4 HSYA对脑缺血再灌注小鼠脑代谢情况影响的影响48-52
• 3.5.5 HSYA对脑缺血再灌注小鼠皮层病理检查结果52-53
• 3.6 实验讨论53-56
• 3.7 本章小结56-57
• 4 HSYA对脑缺血再灌注大鼠保护作用机制的研究57-79
• 4.1 实验材料57
• 4.2 实验用品57-60
• 4.2.1 主要试剂与耗材57-58
• 4.2.2 主要溶液及其配制方法58-59
• 4.2.3 主要仪器59-60
• 4.3 实验方法60-67
• 4.3.1 双侧颈总动脉永久性结扎模型制备方法60
• 4.3.2 避暗试验方法60-61
• 4.3.3 跳台试验方法61
• 4.3.4 实时荧光定量PCR方法61-66
• 4.3.5 免疫组织化学染色方法66-67
• 4.4 实验内容67-68
• 4.4.1 HSYA对脑缺血大鼠学习记忆能力改变的测试67-68
• 4.4.2 RT-PCR法测定NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP转录水平68
• 4.4.3 免疫组织化学法测定NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP蛋白表达68
• 4.5 实验结果68-76
• 4.5.1 HSYA对脑缺血大鼠学习记忆能力的影响68-70
• 4.5.2 HSYA对全脑缺血大鼠脑组织中NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP转录水平的影响70-74
• 4.5.3 HSYA对全脑缺血大鼠脑组织中NF-κB/p65、IL-1β、Caspase-12和CHOP蛋白表达情况的影响74-76
• 4.6 实验讨论76-78
• 4.7 本章小结78-79
• 结论79-80
• 参考文献80-85
• 后记或致谢85-86
• 作者简介及读研期间主要科研成果86

【参考文献】

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本文编号：302879