学习记忆过程中蛋白激酶A催化亚基β在大鼠丘脑外侧背核内的表达

发布时间：2017-04-13 11:49

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【摘要】：目的:大鼠丘脑外侧背核(The lateral dorsal thalamic nucleus,LD)是背侧丘脑的重要组成部分,分为背内侧部(LDDM)和腹外侧部(LDVL)两部分。已有实验证明丘脑背外侧核与空间学习和记忆有关,包括空间参照记忆和空间工作记忆。蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)又称依赖于cAMP的蛋白激酶A(cyclic-AMPdependent protein kinaseA)在学习记忆的信号转导中也起重要作用。本实验研究旨在应用Morris水迷宫行为学建模实验、免疫组化法染色(immunohistochemistry,IHC)技术和蛋白免疫印迹分析(Western Blot)技术,观察建模成功大鼠丘脑外侧背核中蛋白激酶A(PKA)Cβ亚基的表达和分布情况,为深入阐明其在丘脑外侧背核对学习记忆的神经生物学机制提供新颖的形态学资料。方法:本实验选用成年雄性wistar大鼠40只,体重200-250 g,随机分为实验组与对照组,两组大鼠进行为期4天的Morris水迷宫定位航行实验及1天空间探索实验,实验组大鼠水中放置平台进行空间学习记忆模型训练,对照组大鼠水中不放置平台不给予空间学习记忆训练。空间探索实验后两小时内进行乙醚吸入麻醉及水合氯醛(4%)腹腔麻醉,仰卧固定大鼠,充分暴露心脏,4%多聚甲醛心脏灌流固定(Western Blot只用0.9%生理盐水灌流),断头取脑。大脑置于4%多聚甲醛中4°C过夜次日即可用震荡切片机连续冠状切片,片厚30μm。采用兔抗鼠PKA-Cβ亚基抗体作为标记物,应用免疫组化法染色技术观察PKA-Cβ亚基在学习记忆过程中在丘脑外侧背核内的表达和分布情况,显微镜拍照并进行图像分析。Western Blotting实验中,提取丘脑外侧背核组织蛋白,电泳,转印至PVDF膜,目标蛋白为PKA-Cβ亚基,内参为β-actin,凝胶成像仪成像,进行图像分析。组间比较采用两独立样本t检验,组内比较采用配对t检验。Morris水迷宫行为学建模训练中大鼠不同天数逃避潜伏期的比较采用单因素方差分析。结果:1.Morris水迷宫行为学建模实验结果:选取实验组大鼠为期4天的定位航行实验及第5天空间探索实验“逃避潜伏期”数据进行分析发现:定位航行实验中,随着训练天数的增多,实验组大鼠平均“逃避潜伏期”逐渐缩短。每一天平均“逃避潜伏期”相互比较差异有统计学意义,P0.05,但第2天与第3天相比较除外,P0.05。第5天空间探索实验与第4天定位航行实验中大鼠平均“逃避潜伏期”相互比较差异无统计学意义,P0.05。2.免疫组织化学结果:蛋白激酶A(PKA)Cβ亚基免疫阳性产物在实验组大鼠丘脑外侧背核内主要位于神经元胞核和神经纤维中。通过对免疫阳性产物的累积光密度值分析,实验组大鼠丘脑外侧背核内PKA-Cβ亚基在LDDM和LDVL区免疫阳性产物累积光密度值与对照组大鼠丘脑外侧背核内PKA-Cβ亚基在LDDM和LDVL区免疫阳性产物累积光密度值相比,差异有统计学意义(P0.05);实验组LDDM区与LDVL区比较,两者间PKA-Cβ亚基免疫阳性产物差异无统计学差异(P0.05)。3.Western Blot结果:在整个丘脑外侧背核组织内,蛋白激酶A(PKA)Cβ亚基在实验组的表达水平与对照组相比有所增高,差异有统计学意义(P0.05)结论:学习记忆过程中蛋白激酶A(PKA)Cβ亚基在建立学习记忆模型大鼠的丘脑外侧背核内表达升高,说明丘脑外侧背核参与空间学习记忆的机制可能与这种蛋白表达变化有关。
【关键词】：大鼠 学习记忆 PKA-Cβ亚基 丘脑外侧背核 Morris水迷宫
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338.64
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料和方法13-20
• 1.实验材料13-14
• 2.实验动物14
• 3.实验方法14-18
• 4.图像分析18-19
• 5.统计学处理19-20
• 结果20-24
• 附图24-28
• 讨论28-34
• 结论34-35
• 参考文献35-40
• 综述40-52
• 参考文献47-52
• 致谢52-53

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1 张丽丽;学习记忆过程中蛋白激酶A催化亚基β在大鼠丘脑外侧背核内的表达[D];大连医科大学;2015年

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本文编号：303504