抗表皮生长因子受体3（HER3）单链抗体的制备及鉴定

发布时间：2021-02-09 19:31

　　目的表达、纯化并鉴定抗人表皮生长因子受体3（HER3）的单链抗体（scFv）。方法从NCBI查找抗HER3单克隆抗体LJM716的轻链和重链序列,构建抗HER3-scFv基因;利用毕赤酵母组成性表达载体pGAPZαA构建重组表达载体,电转化毕赤酵母,筛选高表达工程菌;工程菌发酵上清经疏水层析和金属离子亲和层析纯化, Western blot法和ELISA鉴定纯化产物。结果成功构建了抗HER3-scFv基因,获得了高表达工程菌;发酵上清经两步层析纯化,获得了纯度达95%以上的抗HER3-scFv,产率为192 mg/L; Western blot结果显示抗HER3-scFv得到正确表达, ELISA结果表明抗HER3-scFv可特异识别HER3。结论成功制备了特异的抗HER3-scFv。 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(10)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

抗HER3-scFv 基因的扩增

通过XhoⅠ和XbaⅠ两种内切酶分别对pGAPZαA 载体和目的基因进行酶切, 酶切后的条带符合预期(图2)。连接后转化大肠杆菌JMC109 大肠杆菌感受态中, 扩增培养后提取质粒。电泳结果显示, 与pGAPZαA 空载体相比, pGAPZαA-HER3-scFv 重组载体的位置更靠近加样孔(图3), 表明目的基因已插入pGAPZαA 表达载体中。图3 重组质粒pGAPZαA-anti-HER3-scFv 电泳图

重组质粒pGAPZαA-anti-HER3-scFv 电泳图

【参考文献】：
期刊论文
[1]抗严重发热伴血小板减少综合征病毒包膜糖蛋白单链抗体的筛选和鉴定[J]. 张文帅,郭喜玲,迟莹,焦永军.  细胞与分子免疫学杂志. 2019(01)



本文编号：3026119