禽流感病毒H7N9人源性单链抗体文库的构建及鉴定

发布时间：2021-02-14 01:18

　　目的构建人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库（scFv）,并对文库质量进行鉴定。方法分离11例H7N9恢复期患者外周血中的单个核淋巴细胞（PBMC）,提取总RNA,逆转录成cDNA;并以此为模板PCR扩增人源性抗体重链可变区（VH）及轻链可变区（Vκ）,再通过重叠PCR法将VH和Vκ基因随机拼接成scFv文库;将构建的scFv文库克隆入噬菌体载体pComb3XSS中,电转化感受态细胞XL1-Blue,制备成完整的人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库;通过计算菌落数量及基因测序检测分析scFv文库的库容量及多样性。结果构建的人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库的库容为1.67×107,测序结果显示scFv文库多样性好,scFv基因阳性率为94.0%,准确率为95.7%。结论成功构建人源性禽流感病毒H7N9单链抗体文库,为后续筛选特异性中和抗体提供了基础。 

【文章来源】：江苏预防医学. 2019,30(06)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

Vκ基因PCR扩增产物电泳图

以VH及Vκ基因为模板，利用1对重叠PCR引物进行PCR扩增拼接，获得分子量约为750bp的目的条带，拼接产物分子量大小与理论值相符，见图3。2.3 H7N9人源性scFv文库的构建及鉴定

根据平板A上的菌落数计算所构建文库库容为1.67×107，即经1次电转化获得一个库容量为1.67×107的H7N9人源性scFv文库；从其中挑选50个单克隆用overlap-PCR引物进行鉴定，显示47个克隆为PCR阳性，见图4，文库scFv基因阳性率为94.0%；序列测定分析47个鉴定阳性的单克隆，发现47个克隆中45个为正确的序列插入且碱基序列不重复，准确率为95.7%，见图5。图5 45个阳性克隆scFv基因序列的进化树分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]天然人源性单链抗体文库的构建及鉴定[J]. 张文帅,迟莹,焦永军.  江苏预防医学. 2017(03)
[2]抗体组库技术研究进展[J]. 张黎,史智扬.  江苏预防医学. 2014(04)



本文编号：3032884