Pin1抑制剂对小鼠植入前胚体外发育和ERα蛋白表达的影响

发布时间：2017-04-23 21:14

  本文关键词：Pin1抑制剂对小鼠植入前胚体外发育和ERα蛋白表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察Pin1在小鼠植入前胚中的定位分布及其抑制剂(Juglone)对小鼠植入前胚体外发育的影响;研究Pin1受抑制后,对干细胞因子m RNA表达和ERa蛋白表达的影响;为进一步阐明Pin1在合子基因组激活中的作用机制提供理论依据。方法:1.分别获取KM雌性小鼠与雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得不同生长阶段的植入前胚,包括卵母细胞(不交配)、1-细胞胚、2-细胞胚、4-细胞胚、8-细胞胚、桑葚胚以及囊胚。通过免疫荧光检测技术(immunofluorescence technique,IF),检测Pin1在以上各阶段植入前胚中的定位分布;2.获取KM雌性小鼠与雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得1-细胞胚,将其置于KSOM培养液及添加有不同溶度Juglone的培养液中进行体外培养,并观察小鼠植入前胚体外发育情况;3.收集体外发育至2-细胞胚(h CG后45h)的植入前胚,利用Realtime-PCR检测KSOM组和Juglone(25mM)组中Sox2、Oct4、c-Myc和Klf4四个干细胞因子m RNA的表达水平;4.分别获取KM雌性小鼠与雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得处于细胞周期间期及分裂期的1-细胞胚和2-细胞胚,通过免疫荧光检测技术(IF),检测Pin1和ERa在以上阶段植入前胚中的定位分布;5.收集体外发育至2-细胞胚(h CG后45h)的植入前胚,利用免疫荧光检测KSOM组和Juglone(25mM)组中胚内pan-ERa和p ERa-S118定位和表达情况。结果:1.免疫荧光结果显示,在卵母细胞和各发育阶段的植入前胚中都存在Pin1蛋白,且细胞胞质和胞核内均有分布,从1-细胞胚开始,细胞核内Pin1荧光着色更为明显;2.Pin1抑制剂(Juglone)作用植入前胚体外发育全程(h CG后27h至120h),Juglone(10mM和25mM)可使1-细胞胚发育阻滞于2-细胞胚,并且极少能过渡至4-细胞胚(P0.01);Pin1抑制剂(Juglone)作用18h(h CG后27h至45h),Juglone(25mM)可使1-细胞胚发育阻滞于2-细胞胚,并且很少能过渡至4-细胞胚(P0.01)。3.Realtime-PCR结果显示,Juglone(25mM)组中,Sox2 m RNA表达水平明显低于KSOM组(P0.05),而Klf4、c-Myc和Oct4 m RNA表达量相较KSOM组无明显差别(P0.05)。4.免疫荧光结果显示,在1-细胞胚至2-细胞胚时期,Pin1与ERa蛋白随着细胞周期进程的定位分布,有着相同的变化。5.Juglone(25mM)组中,2-细胞胚内pan-ERa荧光相对强度与KSOM组比较无明显差别(P0.05)。2-细胞胚内p ERa-S118荧光相对强度高于KSOM组(P0.01)。结论:Pin1抑制剂(Juglone)对2-细胞胚至4-细胞胚体外发育过渡具有明显的抑制作用,出现“2-细胞”阻滞,并使干细胞因子Sox2 m RNA表达下调,提示Pin1可能在合子基因组激活(ZGA)中具有重要作用。同时,Pin1抑制剂使2-细胞胚内ERa磷酸化修饰发生异常变化,说明Pin1可能通过影响ERa的功能活性,从而参与合子基因组激活的调控。
【关键词】：Pin1 Juglone 干细胞因子 雌激素受体α 合子基因组激活
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R321
【目录】：

• 英语缩略语表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 第一部分9-28
• 材料和方法10-18
• 结果18-25
• 讨论25-28
• 第二部分28-38
• 材料和方法29-33
• 结果33-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述43-52
• 参考文献49-52
• 致谢52

【共引文献】

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本文编号：323047