神经示踪剂与组织透明技术兼容性研究
发布时间：2021-06-17 22:12
背景及目的:传统组织切片技术的一个明显弊端在于切片间隔之间组织信息的丢失以及组织完整性的破坏。一种新兴组织学技术-组织透明技术应运而生,并迅速引起广泛关注。组织透明技术是指使用一种试剂或几种试剂组成的混合液,通过浸泡、电泳或灌注等处理方式,使大块组织或完整器官达到视觉下或光学仪器下透明的组织学技术。相对于传统的组织学技术,组织透明技术具有在不破坏组织结构的前提下观察其内部结构的优势。尤其适用于具有“长距离传导”特征的神经系统的研究,可以配合神经示踪技术显示完整的神经传导通路。虽然已经有科研工作者使用组织透明技术与个别示踪剂相结合的方式来研究某一具体的科学问题,但目前仍没有文献对不同示踪剂与不同组织透明技术的兼容性进行系统阐述。方法:本研究第一部分首先选择两种不同类型的代表性示踪剂,即荧光染料示踪剂（Fluoro-Gold 和 Fluoro-Ruby）和携带荧光蛋白的病毒示踪剂（rAAV9-hSyn-mCherry-WPRE-pA和rAAV9-hSyn-EGFP-WPRE-pA）,分别通过微量注射方式对动物的运动传导束进行示踪,切片后对比使用三种代表性透明方法FRUIT、3DISCO以及...
【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
传统的通过切片方式进行的组织学研究
越来越多的科研人员的关注。组织透明技术（Ｔｉｓｓｕｅｏｐｔｉｃａｌｃｌｅａｒｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）是指??使用一种试剂或几种试剂组成的混合液，通过浸泡、电泳或灌注等处理方式，使大块??组织或完整器官达到视觉下或光学仪器下透明的组织学技术［３］（图２）。组织透明技??术的出现为实验动物组织学研宄由二维升级到三维提供了强有力的研宄工具。虽然目??前组织透明技术尚未进入成熟应用阶段，仍有很多问题需要解决或改善，如荧光蛋白??的荧光保留尚不稳定、有机透明溶剂处理不当具有潜在人体危害等等，但是在小型啮??齿类动物的研宄上组织透明技术相对成熟，己经有很多学者应用此技术开展了具体的??科学研究??对研宄对象进行染色或荧光标记后，进行组织透明，可以呈现其完整三维形态。??传统的研究方式即切片方式，虽然也可以通过较多的薄层切片重建三维影像，但切片??间的信息丢失无法避免，这种三维影像是一种“虚拟”的三维影像，相对于此，组织??透明技术可以“真实”地显示研究对象的三维形态和空间比邻，若有合适的光学显微??成像设备支持
ＭＬ；?２．５?ＡＰ，?２．５ＭＬ；?－２．０?ＡＰ，?２．０?ＭＬ；?－１．５?ＡＰ，?２．５?ＭＬ；?－２．５?ＡＰ，?２．５?ＭＬ；?－２．５?ＡＰ，?１．５?ＭＬ；??－１．５?ＡＰ，?１．５?ＭＬ做十个标记［１７］，该标记点主要包括大鼠左侧初级运动皮层区。使用微??型牙科钻做骨窗至硬脑膜（图１．１－Ａ）；参照《Ｔｈｅ?ＲＡＴＢｒａｉｎｉｎ?ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ?ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ》??定位，分组使用微量注射器按上述定位点向左侧Ｍｌ区注射示踪剂，使用纳升微量控??制系统（图１．１－Ｂ、Ｃ）控制进针深度为１．５＿，使注射位置位于富含锥体细胞的第５??层（运动性外导层），注射速度为６ｎｌ／ｓ，每点注射２００ｎｌ，留针５分钟，缓慢撤针，??以防示踪剂从针道溢出。ＦＧ组注射２％Ｆｌｕｏｒｏ－Ｇｏｌｄ溶液，ＦＲ组注射１０％Ｆｌｕｏｒｏ－Ｒｕｂｙ??溶液，Ｃｈｅｒｒｙ组注射同等剂量的ｒＡＡＶ９－ｈＳｙｎ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＷＰＲＥ－ｐＡ?（病毒滴度：??７．３８Ｅ＋１２ｖｇ／ｍｌ）以及?ＧＦＰ?组注射总量如１?的?ｒＡＡＶ９－ｈＳｙｎ－ＥＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ｐＡ?（病毒滴??度：３．８１Ｅ＋１２ｖｇ／ｍｌ）。注射完成后于普通饲养级别下饲养２周，正常进食水。２周后，??深度麻醉大鼠，麻醉方法同前，经心灌注０．１ＭＰＢＳ８０ｍｌ，然后灌注含４％多聚甲醛的??ＰＢＳ溶液５０ｍｌ。取脑及脊髓
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织透明技术[J]. 王培新,张丹,尚爱加,侯冰. 神经解剖学杂志. 2016(01)
[2]神经系统细胞谱系和神经束路示踪技术[J]. 陶华平. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2015(04)
[3]利用嗜神经病毒跨突触追踪神经网络研究进展[J]. 张志建,靳森,朱续涛,贾凡,王华东,刘青,何晓斌,徐富强. 生命科学. 2014(06)
[4]伪狂犬病毒跨突触示踪视觉系统神经网络的研究进展[J]. 张翼,王雄伟,田春雷,罗然,陈中山. 现代生物医学进展. 2013(22)
本文编号：3236015
【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
传统的通过切片方式进行的组织学研究
越来越多的科研人员的关注。组织透明技术（Ｔｉｓｓｕｅｏｐｔｉｃａｌｃｌｅａｒｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）是指??使用一种试剂或几种试剂组成的混合液，通过浸泡、电泳或灌注等处理方式，使大块??组织或完整器官达到视觉下或光学仪器下透明的组织学技术［３］（图２）。组织透明技??术的出现为实验动物组织学研宄由二维升级到三维提供了强有力的研宄工具。虽然目??前组织透明技术尚未进入成熟应用阶段，仍有很多问题需要解决或改善，如荧光蛋白??的荧光保留尚不稳定、有机透明溶剂处理不当具有潜在人体危害等等，但是在小型啮??齿类动物的研宄上组织透明技术相对成熟，己经有很多学者应用此技术开展了具体的??科学研究??对研宄对象进行染色或荧光标记后，进行组织透明，可以呈现其完整三维形态。??传统的研究方式即切片方式，虽然也可以通过较多的薄层切片重建三维影像，但切片??间的信息丢失无法避免，这种三维影像是一种“虚拟”的三维影像，相对于此，组织??透明技术可以“真实”地显示研究对象的三维形态和空间比邻，若有合适的光学显微??成像设备支持
ＭＬ；?２．５?ＡＰ，?２．５ＭＬ；?－２．０?ＡＰ，?２．０?ＭＬ；?－１．５?ＡＰ，?２．５?ＭＬ；?－２．５?ＡＰ，?２．５?ＭＬ；?－２．５?ＡＰ，?１．５?ＭＬ；??－１．５?ＡＰ，?１．５?ＭＬ做十个标记［１７］，该标记点主要包括大鼠左侧初级运动皮层区。使用微??型牙科钻做骨窗至硬脑膜（图１．１－Ａ）；参照《Ｔｈｅ?ＲＡＴＢｒａｉｎｉｎ?ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ?ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ》??定位，分组使用微量注射器按上述定位点向左侧Ｍｌ区注射示踪剂，使用纳升微量控??制系统（图１．１－Ｂ、Ｃ）控制进针深度为１．５＿，使注射位置位于富含锥体细胞的第５??层（运动性外导层），注射速度为６ｎｌ／ｓ，每点注射２００ｎｌ，留针５分钟，缓慢撤针，??以防示踪剂从针道溢出。ＦＧ组注射２％Ｆｌｕｏｒｏ－Ｇｏｌｄ溶液，ＦＲ组注射１０％Ｆｌｕｏｒｏ－Ｒｕｂｙ??溶液，Ｃｈｅｒｒｙ组注射同等剂量的ｒＡＡＶ９－ｈＳｙｎ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＷＰＲＥ－ｐＡ?（病毒滴度：??７．３８Ｅ＋１２ｖｇ／ｍｌ）以及?ＧＦＰ?组注射总量如１?的?ｒＡＡＶ９－ｈＳｙｎ－ＥＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ｐＡ?（病毒滴??度：３．８１Ｅ＋１２ｖｇ／ｍｌ）。注射完成后于普通饲养级别下饲养２周，正常进食水。２周后，??深度麻醉大鼠，麻醉方法同前，经心灌注０．１ＭＰＢＳ８０ｍｌ，然后灌注含４％多聚甲醛的??ＰＢＳ溶液５０ｍｌ。取脑及脊髓
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织透明技术[J]. 王培新,张丹,尚爱加,侯冰. 神经解剖学杂志. 2016(01)
[2]神经系统细胞谱系和神经束路示踪技术[J]. 陶华平. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2015(04)
[3]利用嗜神经病毒跨突触追踪神经网络研究进展[J]. 张志建,靳森,朱续涛,贾凡,王华东,刘青,何晓斌,徐富强. 生命科学. 2014(06)
[4]伪狂犬病毒跨突触示踪视觉系统神经网络的研究进展[J]. 张翼,王雄伟,田春雷,罗然,陈中山. 现代生物医学进展. 2013(22)
本文编号：3236015
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