抑制RhoC对SKOV3在裸鼠动物模型生长的影响

发布时间：2017-04-25 11:06

  本文关键词：抑制RhoC对SKOV3在裸鼠动物模型生长的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景及目的： 卵巢癌是女性常见的生殖系统恶性肿瘤，严重危害广大女性同胞的健康。目前，临床常用治疗手段主要是利用手术的方式减灭恶性肿瘤细胞，并联合放、化疗等治疗手段。尽管有着丰富的临床经验为基础，部分卵巢癌患者的病情得到了一定的缓解，但是卵巢恶性肿瘤的早期诊断，联合治疗的效果，以及治疗后的复发率和5年存活率都不如人意。现下，基因治疗已经成为探索恶性肿瘤治疗手段的新领域。RhoC基因作为Rho（Ras-homologous,Ras同源物）亚家族蛋白中的一员，在卵巢恶性肿瘤中存在着过高表达的情况，已经被广大专家学者所认识。大量的研究亦证实了RhoC基因在卵巢恶性肿瘤中的高表达与恶性肿瘤的侵袭能力呈正相关。我们在前期的体外实验中也发现了RhoC基因在卵巢恶性肿瘤细胞的发生发展过程中有着极其重要的作用。我们通过构建RhoC-miRNA沉默的真核表达载体成功的转染了SKOV3细胞，发现被转染的细胞其生长速度显著减慢，而细胞凋亡的情况却显著增加，进一步表明了RhoC基因在体外细胞层面上具有癌基因的性能。为做进一步探讨RhoC基因被沉默后在体内的作用情况，，本实验应用构建好的RhoC基因DNA干扰的慢病毒载体，成功转染SKOV3细胞，在荷瘤鼠体内进行注射，观察其作用，探讨特异性抑制RhoC基因表达对卵巢癌动物模型的影响，以期为卵巢癌基因治疗新方法提供科学依据。 材料与方法： 选取雌性BALB/c裸小鼠,6～8周龄,体重18～22ｇ进行饲养。将包装好的Lenti-shRhoC和Lenti-NC慢病毒载体委托吉林大学公共卫生学院卫生毒理学重点实验室制备成病毒液并转染到对数生长期的SKOV3细胞中。将BALB/c裸小鼠随机分成3组,分别为未被转染病毒液的空白对照组、转染了Lenti-NC病毒液的阴性对照组和转染了Lenti-shRhoC病毒液的实验组(即Lenti-shRhoC组),每组10只。分组别于皮下注射0.2m（l5×106/ml）的SKOV3、Lenti-NC、Lenti-shRhoC细胞液。每隔2天观察并记录裸小鼠的成瘤情况，对小鼠称重、测量并计算肿瘤体积，绘制生长曲线。于接种后第20日处死裸小鼠，观察肿瘤组织的大体变化。制备石蜡切片行HE染色，观察肿瘤细胞的形态学变化。Westernblot法检测RhoC-miRNA慢病毒注射后皮下移植瘤组织的蛋白表达情况。 结果： 1.三组裸小鼠皮下种植瘤质量与体积变化 注射20ｄ后处死裸小鼠,实验组（即Lenti-shRhoC组）的移植瘤成瘤率、瘤体质量、瘤体体积全部明显低于阴性对照组（即Lenti-NC组）和空白对照组（即SKOV3组），P＜0.01，具有统计学意义。而阴性对照组与空白对照组比较无统计学差异，P＞0.05。 2. Western blotting检测裸小鼠皮下种植瘤中RhoC蛋白的表达情况。 Western-blot法检测结果明确显示,实验组、阴性对照组与空白对照组相对应的RhoC蛋白值分别为0.3865±0.0328、0.4728±0.0257、0.0964±0.0164,结果说明,实验组能显著抑制皮下移植瘤组织中RhoC蛋白的表达。 3.人卵巢癌细胞裸小鼠皮下种植瘤的病理学观察 将剥离下的肿瘤组织中间剖开,肉眼可见空白对照组及阴性对照组的人卵巢瘤细胞裸小鼠移植瘤的肿瘤组织均呈驼峰状或叶状生长,质地稍硬,切面呈灰白色。经过HE染色后,在显微镜下可见人卵巢癌细胞皮下种植瘤的细胞形状大小不一,核大深染,核异型及病理分裂像明显,确定该组织为恶性肿瘤组织。 结论： 利用慢病毒介导的RNAi技术特异性抑制RhoC基因在卵巢癌裸小鼠模型中的体内研究表明了：RhoC-miRNA慢病毒注射对荷人卵巢癌裸小鼠皮下移植瘤具有使肿瘤体积缩小、侵袭能力下降的作用；RhoC-miRNA可以有效抑制RhoC基因蛋白表达水平。
【关键词】：慢病毒 RNAi 卵巢癌 RhoC基因
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R-332;R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 第1章 前言13-16
• 第2章 材料与方法16-20
• 2.1 实验动物与主要试剂16
• 2.2 卵巢癌细胞株 SKOV3 的培养16
• 2.3 重组慢病毒质粒的构建与转染16-17
• 2.4 荷人卵巢癌鼠皮下种植瘤的建立及致瘤能力的观察17
• 2.4.1 BALB/c 裸小鼠的分组17
• 2.4.2 荷瘤鼠的制备17
• 2.5 测量肿瘤体积及制备标本17-18
• 2.6 Westernblot 法检测 RhoC-miRNA 慢病毒注射后皮下种植瘤组织的内 RhoC 蛋白的表达18
• 2.7 HE 染色18-19
• 2.8 统计学处理19-20
• 第3章 实验结果20-24
• 3.1 各组小鼠皮下种植瘤质量与体积变化20-22
• 3.2 Western blotting（免疫蛋白印迹技术）检测人卵巢癌细胞裸小鼠皮下种植瘤中 RhoC 蛋白的表达结果22-23
• 3.3 人卵巢癌细胞裸小鼠皮下种植瘤的病理学观察23-24
• 第4章 讨论24-28
• 第5章 结论28-29
• 引用文献29-32
• 综述32-46
• 参考文献42-46
• 作者简介46-47
• 致谢47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 姜洋;肖尊安;李俊全;;RNA干扰降低烟草植株中内源生长素水平[J];北京师范大学学报(自然科学版);2006年04期

  本文关键词：抑制RhoC对SKOV3在裸鼠动物模型生长的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：326190