细胞因子基因多态性与乙脑灭活疫苗抗体反应及HCV慢性感染相关性研究

发布时间：2017-05-03 04:12

  本文关键词：细胞因子基因多态性与乙脑灭活疫苗抗体反应及HCV慢性感染相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：细胞因子充当免疫细胞间的信使分子,而在机体固有免疫与适应性免疫中发挥重要作用。Thl细胞分泌的细胞因子TNF-α, IL-2, IFN-γ等参与细胞免疫及迟发型超敏反应,在机体抗细胞内微生物感染和细胞免疫所引起的炎症反应中发挥重要作用；Th2细胞分泌的细胞因子IL-4、IL-5、IL-10等参与体液免疫,在抗胞外微生物和寄生虫感染免疫,以及变态反应中发挥重要作用。机体细胞因子网络受到严密控制,细胞因子的表达与功能受基因多态性位点的调节,近年来发现这些多态性位点与一些自身免疫病,病毒感染过程,以及疫苗抗原诱导的免疫反应过程密切相关。宿主遗传因素是影响疫苗免疫反应的重要因素。在不同个体中,相同的疫苗所诱导的免疫应答也是不一致的。然而,有关这方面的研究多集中于乙肝,麻疹,天花等诱导的免疫应答水平相对较低的疫苗。而在一些免疫原性较好的传统灭活疫苗中,宿主遗传因素的效应常常被忽视。因此,本研究从细胞因子基因多态性位点着手,探究其与乙脑灭活疫苗的体液免疫是否相关。此外,多项研究表明,细胞因子基因多态性同样影响着病原的感染进程。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染后,80%人群发展为慢性感染。在病毒感染过程中,机体的天然免疫、固有免疫、适应性免疫对病毒的清除具有重要作用。其中,Thl类细胞因子TNF-α, IL-2, IFN-γ介导细胞免疫过程对HCV的清除尤为重要。因此,本文进行的Thl类细胞因子TNF-α, IL-2基因多态性位点与HCV慢性感染相关性研究,可能为临床诊断及治疗提供基础数据。方法：第一部分：以525名乙脑灭活疫苗接种儿童为研究对象,采用Taqman探针基因分型方法检测细胞因子TNF-a基因rs1800629(-308, G/A), rs3093668(G/C), rs3093726(T/C); IL-2基因rs11932411(A/G), rs11575812(A/G), rs2069762(-330, A/C), rs2069763(-34, T/G), rs4833248(-2811, A/G); IL-4基因rs2243247(-1138, G/A), rs2243248(-1100, A/C), rs2243250(-590, T/C), rs2070874(-33, C/T), rs2227284(2979, T/G), rs2243291 (C/G), rs2243292(A/G);以及IL-10基因rs1800896(-1082, A/G), rs1800871 (-819, T/C), rs1800872(-592, A/C)共18个位点的基因多态性,DNA测序验证,构建单倍型,评估细胞因子多态性位点与乙脑灭活疫苗免疫反应的相关性。第二部分：以云南地区HCV慢性感染者380名,正常对照367名为研究对象,采用TaqMan探针基因分型方法对TNF-α基因rs1800629(-308,G/A),rs3093668(G/C), rs3093726(T/C) IL-2基因rs11575812(A/G), rs2069762(-330, A/C), rs2069763(-34, T/G), rs4833248(-2811, A/G)共7个多态性位点进行基因分型,构建单倍型,评估细胞因子多态性位点与HCV慢性感染相关性。结果：(1)在乙脑疫苗接种的免疫应答研究中,IL-2基因s11932411(A/G), IL-4基因rs2243247(-1138, G/A), rs2243292(A/G)在研究人群中不存在多态性。携带IL-10基因rs1800896(-1082,A/G)位点基因型GG的人群,其乙脑几何平均抗体滴度显著高于携带AA+AG基因型的人群(P0.05)。在亚层分析中,1-6岁年龄组,携带TNF-a基因rs1800629(-308,G/A)位点AG基因型的人群,其乙脑几何平均抗体滴度及阳转率都显著低于携带AA+GG基因型的人群(P0.05)；7-12岁年龄组,携带IL-4基因rs2227284(2979, T/G)位点TG基因型的人群,其乙脑几何平均抗体滴度显著低于携带GG+TT基因型的人群(P0.05)；在女性中,携带IL-2基因rs11575812(A/G)位点等位基因A的人群,其阳转率显著低于携带等位基因G的人群(P0.05), 携带IL-4基因rs2227284(2979, T/G)位点基因型TG的人群,其乙脑几何平均抗体滴度显著低于携带GG+TT基因型的人群(P0.05)。(2)在HCV慢性感染研究中,IL-2基因rs2069762(-330, A/C) CC基因型频率在HCV慢性感染组显著高于正常对照组(0.161 vs 0.101, P0.05), rs2069763(-34,T/G)等位基因G的频率在HCV慢性感染组显著高于正常对照组(0.563 vs 0.511,P0.05),IL-2基因rs11575812-rs2069762-rs2069763-rs4833248构建的单倍型AATG在HCV慢性感染组中的频率显著低于正常对照组(P0.05),IL-2基因的另外两个多态性位点rs11575812(A/G), rs4833248(-2811, A/G)的基因、等位基因以及TNF-a基因rs1800629 (-308, G/A), rs3093668 (G/C) 和 rs3093726 (T/C)位点的基因、等位基因、单倍型频率在HCV慢性感染组和正常对照组中均无显著差异性(P0.05)。结论：(1)IL-10基因rs1800896位点多态性与乙脑灭活疫苗的体液免疫应答水平相关。年龄、性别亚层分析中,TNF-α基因rsl800629位点,IL-2基因rs11575812位点以及IL-4基因rs2227284位点多态性与乙脑灭活疫苗体液免疫反应水平相关,说明细胞因子多态性位点效应可能受年龄,性别因素影响。(2)IL-2基因SNPrs2069762 CC基因型和rs2069763 G等位基因可能是HCV慢性感染的易感因素,rs1157582-rs2069762-rs2069763-rs4833248单倍型AATG可能是HCV慢性感染的保护性因素。
【关键词】：乙脑灭活疫苗 细胞因子 单核苷酸多态性 HCV慢性感染
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 1. 细胞因子的作用10
• 2. 细胞因子与疫苗免疫应答相关性10-11
• 3. 乙型脑炎及乙脑疫苗11-12
• 4. 细胞因子与HCV慢性感染相关性12-13
• 第一部分 细胞因子基因多态性与乙脑灭活疫苗抗体反应相关性研究13-63
• 第一节 乙型脑炎灭活病毒疫苗的接种、样本采集及JEV抗体检测13-15
• 1. 乙型脑炎灭活病毒疫苗的接种和样本的采集13
• 2. 血清样本乙型脑炎病毒中和抗体效价测定13-14
• 3. 乙脑中和抗体测定结果14-15
• 第二节 细胞因子基因多态性与乙脑灭活疫苗抗体反应相关性研究15-63
• 1. 研究对象15
• 2. 实验材料15-16
• 2.1 主要试剂15
• 2.2 主要仪器15-16
• 3. 实验方法16-23
• 3.1 DNA的提取及定量16-17
• 3.2 细胞因子基因单核苷酸多态性位点基因分型17-19
• 3.3 阳性对照的设计19-22
• 3.4 统计学软件处理22-23
• 4. 实验结果23-41
• 4.1 TNF-α基因TaqMan探针分型与测序结果23-26
• 4.2 IL-2基因TaqMan探针分型与测序结果26-31
• 4.3 IL-4基因TaqMan探针分型与测序结果31-38
• 4.4 IL-10基因TaqMan探针分型与测序结果38-41
• 5. 结果分析41-57
• 5.1 研究对象的人口统计学特征资料41
• 5.2 细胞因子基因多态性位点的Hardy-Weinberg平衡检验41-42
• 5.3 抗体阳转率与人群背景、细胞因子基因及单倍型相关性分析42-52
• 5.4 乙脑几何平均抗体滴度与人群背景、细胞因子基因相关性分析52-57
• 6. 讨论57-62
• 7. 小结62-63
• 第二部分 细胞因子基因多态性与HCV慢性感染相关性研究63-80
• 1. 研究对象63
• 2. 实验材料63-64
• 2.1 主要试剂63
• 2.2 主要仪器63-64
• 3. 实验方法64-68
• 3.1 DNA的提取及定量64-65
• 3.2 细胞因子基因单核苷酸多态性位点基因分型65-66
• 3.3 阳性对照的设计66-68
• 3.4 统计学软件处理68
• 4. 实验结果68-73
• 4.1 TNF-α基因TaqMan探针分型结果68-70
• 4.2 IL-2基因TaqMan探针分型结果70-73
• 5. 结果分析73-77
• 5.1 研究对象的临床资料73
• 5.2 IL-2和TNF-α基因的Hardy-Weinberg检验73
• 5.3 IL-2和TNF-α基因SNPs在感染组与对照组中的分布73-74
• 5.4 IL-2和TNF-α基因SNPs在感染组与对照组中的连锁不平衡分析74-76
• 5.5 IL-2和TNF-α基因SNPs在感染组与对照组中的单倍型构建及其频率76-77
• 6. 讨论77-79
• 7. 小结79-80
• 参考文献80-86
• 附录86-87
• 致谢87-88
• 研究生简历88-89

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