SPAG6相互作用蛋白的酵母双杂交筛选

发布时间：2017-05-11 02:15

  本文关键词：SPAG6相互作用蛋白的酵母双杂交筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：构建重组SPAG6-PGBKT7质粒，用Yeast-2-Hybriy实验来筛选出与SPAG6有相互作用的蛋白。 方法：1.在“PubMed”数据库，寻找小鼠SPAG6全长碱基序列，分析SPAG6的活性区域（CDS区）；2.以小鼠睾丸的cDNA为模板，通过PCR技术扩增SPAG6序列；3.TA克隆；4.构建SPAG6/PGBKT7重组质粒；5.将SPAG6/PGBKT7质粒转入AH109细胞以SPAG6/PGBKT7为饵，使其与小鼠cDNA文库，进行酵母双杂交；6.提取酵母质粒；7.酵母质粒转化；8.测序后分析。 结果：构建重组的SPAG6/PGBKT7质粒通过鉴定，结果正确；酵母双杂交实验，初步筛选出数个与SPAG6可能发生相互作用的蛋白。 结论：有许多蛋白与SPAG6有着相互作用。为进一步研究与SPAG6发生相互作用的蛋白提供依据。
【关键词】：SPAG6 酵母双杂交 相互作用蛋白筛选
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q78;R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目录6-8
• 前言8-10
• 1 材料与方法10-26
• 1.1 实验试剂10-11
• 1.2 实验仪器11-12
• 1.3 主要溶液的配制12-13
• 1.4 引物设计13-15
• 1.6 TA 克隆15-18
• 1.6.1 PCR 产物纯化（胶回收法）15-16
• 1.6.2 克隆16
• 1.6.3 转化16-17
• 1.6.4 筛选17
• 1.6.5 质粒提取17-18
• 1.6.6 酶切鉴定18
• 1.6.7 测序鉴定18
• 1.7 质粒重组18-21
• 1.7.1 酶切重组质粒及载体18-19
• 1.7.2 目的片段与载体重组连接19
• 1.7.3 连接产物转化19-20
• 1.7.4 筛选20
• 1.7.5 重组质粒 SPAG6/PGBKT7 提取20-21
• 1.7.6 Spag6/PBGKT7 重组质粒的酶切鉴定21
• 1.8 Yeast-2-Hybriy 实验21-24
• 1.8.1 酵母感受态细胞的制备21-22
• 1.8.2 酵母感受态细胞质粒 DNA 转化22-23
• 1.8.3 酵母双杂交23-24
• 1.9 酵母质粒筛选24
• 1.10 酵母质粒提取24-25
• 1.11 酵母质粒的鉴定25-26
• 2 结果26-35
• 2.1 小鼠的 SPAG6 碱基序列26-27
• 2.2 小鼠 SPAG6 的 PCR 结果27-28
• 2.3 TA 克隆连接产物酶切鉴定结果28-29
• 2.4 SPAG6 质粒测序结果29-31
• 2.5 克隆质粒 SPAG6 及载体质粒 PGBKT7 酶切结果31-32
• 2.6 SPAG6/PGBKT7 重组质粒酶切结果32-33
• 2.7 酵母质粒测序图部分结果截图33-34
• 2.8 酵母质粒测序分析后部分结果34-35
• 3 讨论35-38
• 4 结论与展望38-39
• 参考文献39-45
• 致谢45-46
• 综述46-54
• 参考文献51-54
• 附录 1 攻读硕士学位期间发表的论文54-55
• 附录 2 攻读硕士学位期间参加的科研项目55-56
• 附录 3 质粒及载体质粒图谱56-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：356047