敲除星形胶质细胞的dicer对中枢神经系统的影响

发布时间：2017-05-11 00:08

  本文关键词：敲除星形胶质细胞的dicer对中枢神经系统的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：星形胶质细胞是脊椎动物中枢系统中的一种大量存在的细胞,占中枢神经系统细胞总量的80%以上。在中枢神经系统中,星形胶质细胞起到了非常重要的作用,其中包括构建血脑屏障,为神经元神经组织提供营养,维持细胞外的离子平衡,在中枢神经组织的损伤修复中参与形成胶质瘢痕。dicer是一种核糖核苷酸内切酶,在人类体内是由DICER1基因编码产生的Dicer属于RNA酶III家族,Dicer能够切割双链RNA(dsRNA)和小RNA前体,将他们切割成小片段的双链RNA,我们分别称之为小干扰RNA,以及micro-RNA30。这种双链的小片段RNA通常是由20-25个碱基对外带两个碱基的突出3’末端碱基组成32。Dicer促进RNA诱导的沉默复合物(RISC)的激活,这种复合物的激活对于RNA干扰起着至关重要的作用32。我们之前的研究表明,在神经系统发育的早期,敲除星形胶质细胞中的dicer对星形胶质细胞的发育起着至关重要的作用。以人的GFAP启动子启动的Cre的表达能条件性敲除GFAP阳性细胞中的Dicer的生成,从而影响miRNA的成熟。星形胶质细胞中成熟miRNA的缺失虽然不会影响星形胶质细胞的产生,甚至不会影响星形胶质细胞迁移到既定的目标位置,但是缺少miRNA会导致星形胶质细胞的成熟延迟。而为了进一步搞清GFAP阳性星形胶质细胞中的dicer在成熟的中枢神经系统的作用,我们使用了以小鼠GFAP启动子启动的Cre表达条件性敲除的GFAP阳性细胞中的dicer。通过对小鼠脊髓切片,大脑切片的检测,发现在小鼠的神经系统成熟后,星形胶质细胞dicer对中枢神经系统的稳态起到了至关重要的作用。
【关键词】：星形胶质细胞 dicer 脊髓 大脑 髓鞘 少突胶质细胞 神经元
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 致谢5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 综述12-22
• 1.1 引言12
• 1.2 与星形胶质细胞有关的病理过程12-15
• 1.3 星形胶质细胞与髓鞘化的形成15-18
• 1.4 认识dicer18-20
• 1.4.1 dicer的基本功能18
• 1.4.2 dicer的发现历史18-19
• 1.4.3 dicer的在RNA干扰中的作用19-20
• 1.5 Dicer在神经系统中的功能及作用20-22
• 2.实验的内容与设计22-25
• 2.1 实验的目的与意义22-23
• 2.2 实验内容23-24
• 2.3 试验流程图24-25
• 3. 试验试剂与方法25-37
• 3.1 实验动物饲养与基因型鉴定25-27
• 3.1.1 材料25
• 3.1.2 实验用小鼠基因型25-26
• 3.1.3 小鼠基因型鉴定方法26-27
• 3.2 试剂与配方27-31
• 3.3 试验方法31-37
• 3.3.1 感受态细胞制备与连接产物转化31
• 3.3.2 总RNA提取与cDNA的获得31-32
• 3.3.3 基因克隆与载体构建32-33
• 3.3.4 原位杂交探针的制备33-34
• 3.3.5 小鼠材料的准备34
• 3.3.6 免疫荧光试验方法34-35
• 3.3.7 原位杂交35-36
• 3.3.8 电镜材料的处理方法36-37
• 4. 实验结果37-50
• 4.1 小鼠基因型鉴定37-38
• 4.2 敲除GFAP阳性的星形胶质细胞对脊髓的影响38-40
• 4.3 大脑中micro-RNA对星形胶质细胞的影响40-42
• 4.4 星形胶质细胞micro-RNA对大脑髓鞘的影响42-47
• 4.5 星形胶质细胞micro-RNA对大脑皮层神经元的影响47-50
• 5. 总结与讨论50-52
• 5.1 实验总结50-51
• 5.2 讨论51-52
• 参考文献52-56
• 个人简介56

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