抗人异麦芽糖酶卵黄抗体和蔗糖酶卵黄抗体的制备及其活性探讨

发布时间：2017-05-11 10:11

  本文关键词：抗人异麦芽糖酶卵黄抗体和蔗糖酶卵黄抗体的制备及其活性探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:制备抗人异麦芽糖酶卵黄抗体(I-Ig Y)和抗人蔗糖酶卵黄抗体(S-Ig Y),探讨其对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖的影响。方法:(1)抗人I-Ig Y和S-Ig Y的制备及鉴定:人异麦芽糖酶(ISO)和人蔗糖酶(SUC)作为抗原免疫产蛋鸡,硫酸钠水稀释提取法分离纯化鸡Ig Y,BCA法测定蛋白含量,SDS-PAGE分析Ig Y纯度,间接ELISA法检测Ig Y的效价,Western blot鉴定Ig Y的特异性;PNPG法测Ig Y对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果;ELISA法评价在不同温度、不同p H、胃蛋白酶、胰蛋白酶的条件下Ig Y的稳定性;灌胃BALB/c小鼠检测Ig Y的毒性。(2)建立T2DM大鼠模型:高糖高脂饲料喂养的SD大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(STZ),获得T2DM大鼠模型。(3)抗人I-Ig Y和S-Ig Y对T2DM大鼠空腹血糖影响:正常组、T2DM模型对照组、抗人I-Ig Y干预组、抗人S-Ig Y干预组和阿卡波糖干预组连续灌胃4周,分别在第2、3、4周测定其空腹血糖(FBG)水平。(4)抗人I-Ig Y和S-Ig Y对T2DM大鼠糖耐量的影响:每组大鼠禁食不禁水12小时后,正常组灌胃葡萄糖溶液,模型对照组灌胃葡萄糖溶液和0.01mol/L PBS,抗人I-Ig Y组灌胃葡萄糖溶液和抗人I-Ig Y,抗人S-Ig Y组灌胃葡萄糖溶液和抗人S-Ig Y,阿卡波糖组灌胃葡萄糖溶液和阿卡波糖。分别于0、1、2小时后尾静脉取血检测血糖水平。结果:(1)硫酸钠水稀释提取法获得的Ig Y含量高且蛋白杂带较少,抗人I-Ig Y和S-Ig Y效价达1:12800,Western blot检测结果表明两种Ig Y均能与相应的抗原特异性结合。(2)抗人I-Ig Y和S-Ig Y对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度值(IC50)分别为0.616mg/m L和0.537mg/m L。(3)抗人S-Ig Y相对于抗人I-Ig Y,其拥有较好的热稳定性、较好的酸碱稳定性和相对较好的胃蛋白酶抵抗力,但对胰蛋白酶抵抗力较差,两种Ig Y对BALB/c小鼠均没有毒性。(4)T2DM大鼠建模成功;(5)与对照组相比,抗人S-Ig Y能降低T2DM大鼠的FBG含量(P0.05),抗人I-Ig Y和抗人S-Ig Y均能改善T2DM大鼠的糖耐量(P0.05)。结论:经ISO和SUC作为抗原免疫产蛋鸡收获的抗人I-Ig Y和S-Ig Y均能改善T2DM大鼠的糖耐量,抗人S-Ig Y能降低T2DM的FBG水平。
【关键词】：卵黄抗体 α-葡萄糖苷酶 异麦芽糖酶 蔗糖酶 Ⅱ型糖尿病 血糖
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 1 材料与方法11-18
• 2 结果18-32
• 3 讨论32-35
• 4 结论35-36
• 参考文献36-40
• 综述40-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 作者简介50

【参考文献】

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本文编号：357036