赭曲霉毒素A五价纳米抗体的表达及其免疫亲和柱的制备
发布时间：2022-01-25 22:58
赭曲霉毒素（Ochratoxin）是由曲霉菌属（Aspergillus）和青霉菌属（Penicillium）的某些种产生的次级代谢产物,包含7种结构类似的化合物。其中赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）毒性最强,具有肾脏毒性、肝脏毒性及致畸、致癌和致突变等特性。纳米抗体（Nanobody,Nb）又被称为单域重链抗体（Variable domain of heavy chain antibody,VHH）,由天然缺失轻链的重链可变区构成,是自然存在的可与抗原结合的最小片段,具有分子质量小、易改造、易于表达以及稳定性好等优点。随着科学技术的发展与研究的深入,结合基因工程技术经过改造携带特定结构的纳米抗体具有更加明显的优势,如多价纳米抗体、融合型纳米抗体、多特异性纳米抗体等均具有未改造前纳米抗体所没有的特性,为建立更加灵敏的检测方法提供了基础。免疫亲和柱技术是通过存在于生物体抗原和抗体之间的高度特异性和亲和力,来达到分离纯化的一种方法。与其他提取方法比较,免疫亲和柱技术具有有毒试剂使用少、方便简洁、有效排除基质干扰等优点。本研究基于原核表达载体pET-CTB-VHH28,将其转化...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
赭曲霉毒素A的化学结构式
体抗原和抗体之间的高度特异性和亲和力，来达到分离纯化的一种方法。与其他提取方法比较，免疫亲和柱净化技术还有其他优势。主要表现：提取时避免使用有毒有机溶剂，减少对操作人员的损害；方便快捷，简化了前处理步骤；由于净化处理彻底，减少了基质中的杂质干扰，数据更加可靠。目前免疫亲和柱的制备通常是选用免疫球蛋白 G（Immunoglobulin G，IgG），将其与载体进行偶联，从而制备成相应的免疫亲和柱。亲和柱的制备主要分为以下步骤：载体材料的选择、材料的活化、配体的偶联、封闭多余位点，最后进行清洗保存。其中材料的活化效果与配体偶联的过程对亲和柱的性能起着决定性作用。亲和柱载体种类繁多，常用的载体有三大类：琼脂糖凝胶、纤维素、有机基体（如聚丙烯酰胺凝胶和聚乙烯凝胶等）。载体活化的原理是要在载体骨架上引入强亲电的基团，这些基团可以与抗体上亲核基团-NH2、-OH、-SH 等发生取代反应，从而使抗体可以成功的连接在载体上[30]。现如今常用的载体活化方式包括环氧活化、溴化氰活化以及戊二醛活化等，溴化氰活化的琼脂糖是通常被选用的亲和柱载体材料[31]。其原理如下图 1-2 所示。
图 1-3 抗体结构示意图Fig.1-3 Schematic structural diagram of an antibodyA-传统四链结构抗体；B-骆驼血液中的重链抗体；C-纳米抗体A-Conventional IgG；B-Heavy-chain IgG；C-Nanobody纳米抗体为单域抗体，故其和 IgG 比较具有一些独特的性质，因其内半胱氨酸，分子间会形成牢固的二硫键，使 VHH 的稳定性得到极大地VHH 具有传统抗体的高亲和性、高特异性等优点，因其分子量小的缘故有效的穿透组织并识别传统抗体所不能识别的或者隐藏的抗原表位，抗原识别能力强。VHH 通常是由抗体库中筛选而来，对筛选到的 V行免疫学实验分析，结果表明其大都都具有较高的亲和力和较好的特对 VHH 的互补决定区（Complementarity-determining region，CDR）3抗体 CDR3 对比分析可知，这两者之间具有高度的同源性，故其免疫，可以将 VHH 用于临床医学治疗。
【参考文献】：
期刊论文
[1]免疫亲和柱的制备及在真菌毒素检测中应用的研究进展[J]. 袁艺,陆廷瑾,沈腾腾,秦学磊,刘莹,焦志培,廖惊殊,张东升. 食品工业科技. 2013(24)
[2]纳米抗体的应用及其研究新进展[J]. 姜忍忍,许超,周小理,姚刚. 生命的化学. 2013(03)
[3]纳米抗体的特性及其应用研究进展[J]. 郭婷,张宇昊,马良. 食品科学. 2013(03)
[4]硅胶载体氯霉素免疫亲和柱的制备[J]. 张灿,周婷,陆介宇,段玉清,王硕,于娇. 食品科学. 2012(24)
[5]亲和层析介质上蛋白质偶联位点的控制方法[J]. 冯静,黄孟军,张贵锋,孔英俊,高建萍,黄永东,苏志国. 过程工程学报. 2012(02)
[6]赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及直接竞争酶联免疫吸附法的建立[J]. 石爽,卢锋,杨美华,庄辉. 解放军医学杂志. 2010(12)
[7]纳米抗体及其应用[J]. 杨珂,王冬. 细胞与分子免疫学杂志. 2008(04)
[8]免疫亲合色谱的原理及其在食品安全检测中的应用[J]. 张国华,赖卫华,金晶,盛志超. 食品科学. 2007(10)
[9]大肠杆菌高效表达重组蛋白策略[J]. 任增亮,堵国成,陈坚,吴敬. 中国生物工程杂志. 2007(09)
[10]真菌毒素检测方法研究进展[J]. 胡娜,徐玲. 食品科学. 2007(08)
本文编号：3609344
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
赭曲霉毒素A的化学结构式
体抗原和抗体之间的高度特异性和亲和力，来达到分离纯化的一种方法。与其他提取方法比较，免疫亲和柱净化技术还有其他优势。主要表现：提取时避免使用有毒有机溶剂，减少对操作人员的损害；方便快捷，简化了前处理步骤；由于净化处理彻底，减少了基质中的杂质干扰，数据更加可靠。目前免疫亲和柱的制备通常是选用免疫球蛋白 G（Immunoglobulin G，IgG），将其与载体进行偶联，从而制备成相应的免疫亲和柱。亲和柱的制备主要分为以下步骤：载体材料的选择、材料的活化、配体的偶联、封闭多余位点，最后进行清洗保存。其中材料的活化效果与配体偶联的过程对亲和柱的性能起着决定性作用。亲和柱载体种类繁多，常用的载体有三大类：琼脂糖凝胶、纤维素、有机基体（如聚丙烯酰胺凝胶和聚乙烯凝胶等）。载体活化的原理是要在载体骨架上引入强亲电的基团，这些基团可以与抗体上亲核基团-NH2、-OH、-SH 等发生取代反应，从而使抗体可以成功的连接在载体上[30]。现如今常用的载体活化方式包括环氧活化、溴化氰活化以及戊二醛活化等，溴化氰活化的琼脂糖是通常被选用的亲和柱载体材料[31]。其原理如下图 1-2 所示。
图 1-3 抗体结构示意图Fig.1-3 Schematic structural diagram of an antibodyA-传统四链结构抗体；B-骆驼血液中的重链抗体；C-纳米抗体A-Conventional IgG；B-Heavy-chain IgG；C-Nanobody纳米抗体为单域抗体，故其和 IgG 比较具有一些独特的性质，因其内半胱氨酸，分子间会形成牢固的二硫键，使 VHH 的稳定性得到极大地VHH 具有传统抗体的高亲和性、高特异性等优点，因其分子量小的缘故有效的穿透组织并识别传统抗体所不能识别的或者隐藏的抗原表位，抗原识别能力强。VHH 通常是由抗体库中筛选而来，对筛选到的 V行免疫学实验分析，结果表明其大都都具有较高的亲和力和较好的特对 VHH 的互补决定区（Complementarity-determining region，CDR）3抗体 CDR3 对比分析可知，这两者之间具有高度的同源性，故其免疫，可以将 VHH 用于临床医学治疗。
【参考文献】：
期刊论文
[1]免疫亲和柱的制备及在真菌毒素检测中应用的研究进展[J]. 袁艺,陆廷瑾,沈腾腾,秦学磊,刘莹,焦志培,廖惊殊,张东升. 食品工业科技. 2013(24)
[2]纳米抗体的应用及其研究新进展[J]. 姜忍忍,许超,周小理,姚刚. 生命的化学. 2013(03)
[3]纳米抗体的特性及其应用研究进展[J]. 郭婷,张宇昊,马良. 食品科学. 2013(03)
[4]硅胶载体氯霉素免疫亲和柱的制备[J]. 张灿,周婷,陆介宇,段玉清,王硕,于娇. 食品科学. 2012(24)
[5]亲和层析介质上蛋白质偶联位点的控制方法[J]. 冯静,黄孟军,张贵锋,孔英俊,高建萍,黄永东,苏志国. 过程工程学报. 2012(02)
[6]赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及直接竞争酶联免疫吸附法的建立[J]. 石爽,卢锋,杨美华,庄辉. 解放军医学杂志. 2010(12)
[7]纳米抗体及其应用[J]. 杨珂,王冬. 细胞与分子免疫学杂志. 2008(04)
[8]免疫亲合色谱的原理及其在食品安全检测中的应用[J]. 张国华,赖卫华,金晶,盛志超. 食品科学. 2007(10)
[9]大肠杆菌高效表达重组蛋白策略[J]. 任增亮,堵国成,陈坚,吴敬. 中国生物工程杂志. 2007(09)
[10]真菌毒素检测方法研究进展[J]. 胡娜,徐玲. 食品科学. 2007(08)
本文编号：3609344
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