人ALOX5AP基因启动子的克隆及生物信息学分析

发布时间：2022-01-26 03:23

　　目的克隆人ALOX5AP（Arachidonate 5-lipoxygenase activating protein）基因启动子区域并构建荧光素酶报告基因表达载体,运用生物信息学分析该序列并预测启动子候选区及转录因子结合位点。方法 PCR扩增ALOX5AP基因转录起始点上游2 000 bp的片段,将其连接至p GL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因重组质粒,MluⅠ与HindⅢ双酶切及测序鉴定。采用Promoter 2. 0、CpGPlot、Ali Baba 2. 1等软件对启动子及转录因子结合位点进行预测与分析。结果构建了含有ALOX5AP基因启动子序列的重组质粒,双酶切与测序验证构建成功。生物信息学分析表明ALOX5AP基因转录起始点上游2 000 bp有3个启动子候选区,未发现CpG岛;上游区域共发现245个潜在的转录因子结合位点,分布在启动子候选区内的有Pit-1α、TBP、TBPWT1-κ、Sox-2等。结论成功构建人ALOX5AP基因启动子荧光素酶报告基因表达载体,生物信息学分析鉴定出启动子候选区,其中含有多个潜在的转录因子结合位点,为ALOX5AP基因的转录调控分... 

【文章来源】：泰山医学院学报. 2020,41(03)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

p GL3-A2000的测序验证

Cp GPlot检测结果

Meth Primer检测结果


本文编号：3609715