以苯环为连接桥的肺炎多糖结合疫苗及其免疫学性质研究

发布时间：2022-12-08 19:22

　　肺炎链球菌是一种革兰氏阳性菌,能够引起高死亡率的侵袭性肺炎疾病。荚膜多糖是肺炎链球菌的主要致病成分,早期曾以荚膜多糖作为疫苗预防肺炎链球菌的感染。然而,荚膜多糖是一种T细胞非依赖抗原,免疫持续时间短,不能诱导免疫记忆,不能为婴幼儿和儿童提供免疫保护作用。肺炎荚膜多糖与具有辅助性T细胞抗原表位的载体蛋白共价结合,这种多糖结合疫苗会极大改善多糖的免疫学性质,并能有效保护婴幼儿和儿童。例如,2010年于美国上市的13价肺炎结合疫苗显著降低了侵袭性肺炎链球菌疾病的发病率。然而,肺炎多糖结合疫苗的免疫保护作用有待进一步优化。研究表明多糖链的长度、糖蛋白比、化学结合策略等因素会影响结合疫苗的免疫学性质。有文献报道,适当的佐剂与多糖结合疫苗上的载体蛋白偶联会提高结合疫苗的免疫原性。此外,由于结合疫苗中存在载体蛋白诱导的表位抑制作用（CIES）,即较高的载体蛋白特异性抗体滴度会抑制多糖特异性抗体的产生。因此,通过适当屏蔽载体蛋白的抗原表位降低CIES效应,是改善结合疫苗免疫学性质的有效策略之一。近期的研究结果表明,苯环作为连接桥可以改变PEG的构象,能更为有效地屏蔽葡激酶的抗原表位,从而改善葡激酶在体... 

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 肺炎链球菌及其致病性
        1.1.1 肺炎链球菌生物学特征
        1.1.2 肺炎链球菌致病概况
        1.1.3 肺炎球菌疾病的防治
    1.2 多糖结合疫苗设计策略
        1.2.1 多糖抗原的选择及修饰
        1.2.2 载体蛋白的选择及修饰
        1.2.3 糖蛋白偶联方式及结合策略
    1.3 结合疫苗的分离纯化技术
        1.3.1 离子交换层析
        1.3.2 超滤
        1.3.3 尺寸排阻层析
    1.4 结合疫苗的物理化学性质检测方法
        1.4.1 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        1.4.2 尺寸排阻层析
        1.4.3 核磁共振
        1.4.4 圆二色光谱
        1.4.5 内源荧光光谱
        1.4.6 多糖蛋白测定方法
        1.4.7 动态光散射
    1.5 结合疫苗免疫学性质检测方法
    1.6 立题依据及研究思路
        1.6.1 立题依据
        1.6.2 研究思路
2 14型肺炎多糖结合疫苗的制备
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
            2.1.2.1 14型肺炎多糖(PS)的衍化
            2.1.2.2 破伤风类毒素(TT)的衍生化
            2.1.2.3 多糖与破伤风类毒素的偶联
        2.1.3 多糖结合疫苗偶联效果鉴定及分离纯化
            2.1.3.1 SDS-PAGE电泳法鉴定
            2.1.3.2 尺寸排阻层析法分离纯化
        2.1.4 多糖结合疫苗的结构分析
            2.1.4.1 总糖量的测定
            2.1.4.2 游离多糖的测定
            2.1.4.3 蛋白浓度的测定
            2.1.4.4 多糖修饰程度的测定
            2.1.4.5 动态光散射
            2.1.4.6 ~1H核磁波谱鉴定
    2.2 结果与讨论
        2.2.1 SDS-PAGE电泳
        2.2.2 多糖蛋白衍化
        2.2.3 尺寸排阻层析
        2.2.4 蛋白浓度测定
        2.2.5 游离多糖比例和多糖蛋白比率的测定
        2.2.6 动态光散射测定
        2.2.7 核磁共振氢谱鉴定
    2.3 本章小结
3 肺炎多糖结合疫苗免疫学评价
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
            3.1.2.1 动物免疫
            3.1.2.2 包被抗原的制备
            3.1.2.3 抗体滴度检测
            3.1.2.4 抗14型肺炎荚膜多糖IgG抗体特异性检测
            3.1.2.5 抗14型肺炎荚膜多糖IgG抗体亲合性检测
            3.1.2.6 抗原的完整性检测
            3.1.2.7 脾细胞细胞因子分泌水平检测
    3.2 结果与讨论
        3.2.1 抗体水平检测
            3.2.1.1 抗肺炎14型荚膜多糖IgM、IgG及其亚型的抗体滴度测定
            3.2.1.2 连接分子特异性IgG检测
            3.2.1.3 苯环特异性IgG检测
            3.2.1.4 抗TT的IgG及其亚型的抗体滴度测定
            3.2.1.5 抗肺炎14型荚膜多糖抗体特异性检测
            3.2.1.6 抗肺炎14型荚膜多糖抗体亲合力
            3.2.1.7 抗原完整性检测
        3.2.2 脾细胞培养上清细胞因子水平检测
    3.3 本章小结
4 结论
    4.1 主要研究成果
    4.2 论文创新点
参考文献
致谢
个人简历及发表文章目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]儿童感染肺炎链球菌的耐药性分析[J]. 丁燕玲,徐少林,侯云生,傅锦坚.  中国妇幼保健. 2017(02)
[2]酶联免疫吸附试验法研究PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF在小鼠体内的药代动力学[J]. 马国昌,陈枢青,朱振洪,黄岩山,潘会强,周金宝.  药学学报. 2007(02)
[3]肺炎球菌感染性疾病与肺炎球菌疫苗[J]. 吉田 敦,任常陵.  日本医学介绍. 2007(02)
[4]肺炎球菌疫苗进展[J]. 栗克喜.  微生物学免疫学进展. 2002(02)
[5]结合疫苗概述[J]. 王燕,王秉瑞,谢贵林.  微生物学免疫学进展. 2000(01)



本文编号：3713983