小鼠胚胎腭突细胞的培养和初级纤毛的观察

发布时间：2017-05-17 14:08

  本文关键词：小鼠胚胎腭突细胞的培养和初级纤毛的观察，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过对小鼠胚胎腭突上皮细胞的分离和体外培养,建立稳定良好的小鼠胚胎腭突上皮细胞原代培养方法;分离、培养小鼠胚胎腭突间充质细胞,观察其初级纤毛的情况,为后续小鼠胚胎腭突发育期间关键信号因子通过初级纤毛传递的实验研究奠定基础。方法:体式显微镜下剪取GD13.5的小鼠胚胎腭板,经0.4%Dispase II酶消化过夜后,机械分离上皮组织和间充质组织。1将上皮组织用0.05%胰蛋白酶消化,选择含5%FBS和5ng/ml EGF的Medium 171培养基进行培养,观察细胞形态及其生长情况,运用P-CK和Vim免疫细胞化学染色法对细胞类型进行鉴定;2将间充质组织用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA混合液消化,加入含有10%FBS的DMEM/F12(1:1)培养基中进行原代培养及传代,观察细胞形态及其生长情况,采用P-CK和Vim免疫细胞化学染色法对细胞类型进行鉴定,免疫荧光双标技术检测间充质细胞αα-tubulin和γ-tubulin的表达,观察其初级纤毛的情况。结果:应用Dispase II酶和胰酶双重消化法,结合机械分离可以获取纯度较高的小鼠胚胎腭突上皮细胞和间充质细胞。镜下观察:1上皮细胞彼此紧密相连成片后呈典型的铺路石样,免疫细胞化学染色结果显示上皮细胞P-CK表达阳性;2间充质细胞呈梭形或多角形散在生长,免疫细胞化学染色结果显示间充质细胞Vim表达阳性,免疫荧光双标技术检测间充质细胞中αα-tubulin呈红色荧光、γ-tubulin呈绿色荧光,应用荧光显微镜成功观察到小鼠胚胎腭突间充质细胞上的初级纤毛结构。结论:1结合机械分离和酶消化法可用于小鼠胚胎腭突上皮细胞和间充质细胞的分离及培养,并可获得纯度较高的小鼠胚胎腭突上皮细胞和间充质细胞。2小鼠胚胎腭突间充质细胞中有初级纤毛结构。
【关键词】：小鼠胚胎腭突 上皮细胞 间充质细胞 初级纤毛
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R321
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-11
• 第一部分 小鼠胚胎腭突上皮细胞的培养及其鉴定11-23
• 材料与方法11-17
• 实验结果17-19
• 讨论19-23
• 第二部分 小鼠胚胎腭突间充质细胞的培养、鉴定及其初级纤毛的观察23-31
• 材料与方法23-25
• 实验结果25-27
• 讨论27-31
• 全文总结31-32
• 参考文献32-36
• 综述：初级纤毛与牙颅颌面发育的相关性研究进展36-43
• 参考文献41-43
• 致谢43-44
• 作者简介44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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  本文关键词：小鼠胚胎腭突细胞的培养和初级纤毛的观察，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：373616