小鼠肺炎链球菌脂蛋白SPD 1 609多克隆抗体的制备

发布时间：2023-04-01 12:07

　　目的制备肺炎链球菌脂蛋白SPD₁609的小鼠多克隆抗体。方法通过PCR扩增肺炎链球菌D39菌株中的spd₁609基因,连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒pGEX-4T-1609。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶-SPD₁609(GST-1609)融合蛋白。利用GST亲和层析柱纯化GST-1609融合蛋白,纯化后的融合蛋白用凝血酶(thrombin)外切酶切掉GST标签,进一步通过GST亲和层析得到SPD₁609蛋白。用纯化的不含GST标签的SPD₁609蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA检测抗体的效价, Western blot法检测抗体的特异性。结果成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1609,经GST亲和层析柱分离纯化后可得到相对分子质量(M_r)35 000的SPD₁609蛋白,蛋白纯度在95%以上。ELISA检测结果显示纯化后...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因spd₁609的扩增
        1.2.2 原核表达载体的构建和鉴定
        1.2.3 目的蛋白SPD₁609的诱导表达和纯化
        1.2.4 SPD₁609蛋白鼠多克隆抗体的制备
        1.2.5 ELISA检测多克隆抗体的效价
        1.2.6 Western blot法检测多克隆抗体的特异性
2 结果
    2.1 PCR扩增spd₁609基因
    2.2 重组质粒pGEX-4T-1609的鉴定
    2.3 融合蛋白GST-1609的诱导表达
    2.4 SPD₁609蛋白的纯化
    2.5 SPD₁609蛋白小鼠多克隆抗体具有较高的效价和较好的特异性
3 讨论



本文编号：3777116