P小体相关蛋白MOV10结合于EV71基因组5’UTR并调控病毒复制

发布时间：2017-05-24 11:10

  本文关键词：P小体相关蛋白MOV10结合于EV71基因组5’UTR并调控病毒复制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肠道病毒EV71是手足口病的主要病原体之一,其基因组为单链正股RNA,在感染过程中病毒RNA复制和翻译过程通常会受到宿主细胞内RNA代谢相关蛋白的影响。在本研究中,我们首次发现宿主细胞内的P小体相关蛋白MOV10在EV71感染过程中发挥重要作用：敲除细胞内的MOV10蛋白后,EV71在宿主细胞内的复制和翻译均被明显抑制；一定剂量范围内过表达MOV10蛋白可以促进EV71的复制,然而随着表达剂量的递增,过量的MOV10会反过来限制病毒复制。进一步的研究表明,MOV10可以分别结合在EV71基因组5’UTR区域的三叶草结构和IRES结构,进而影响病毒复制。有趣的是,我们发现过表达MOV10蛋白的N端可以显著抑制EV71蛋白水平的表达,预示MOV10蛋白在EV71感染中的双重作用。此外,我们还发现,MOV10在病毒感染过程中可以与核蛋白TDP43,FUS以及HuR在细胞质中发生共定位,提示MOV10可能通过与其他宿主蛋白的相互作用来完成对EV71感染过程的调控。
【关键词】：手足口病 EV71病毒 MOV10蛋白 解旋酶 三叶草结构 内部核糖体进入位点 P小体 应激颗粒 RNA结合蛋白
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373
【目录】：

• 缩略语4-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-9
• 第一章 文献综述9-21
• 1.1 EV71概述9-16
• 1.1.1 手足口病简介9
• 1.1.2 EV71流行病学调查9-10
• 1.1.3 EV71的结构与相关功能10-12
• 1.1.4 EV71基因组5'UTR对自身复制与翻译的调控12-13
• 1.1.5 EV71的生活周期13-14
• 1.1.6 EV71与宿主免疫14-15
• 1.1.7 EV71的疫苗研究15
• 1.1.8 EV71的动物模型15-16
• 1.2 MOV10与P小体概述16-21
• 1.2.1 P小体简介16
• 1.2.2 P小体与病毒感染16-18
• 1.2.3 MOV10简介18-19
• 1.2.4 MOV10与病毒感染19-21
• 第二章 MOV10在EV71感染过程中的功能研究21-49
• 2.1 实验材料21-24
• 2.1.1 细胞系和EV71毒株21
• 2.1.2 抗体21
• 2.1.3 质粒和质粒转染21-22
• 2.1.4 siRNA和RNA干扰22
• 2.1.5 统计22
• 2.1.6 主要实验试剂配制22-23
• 2.1.7 其他试剂23-24
• 2.2 实验方法24-29
• 2.2.1 MOV10 C端和N端质粒的构建24-25
• 2.2.2 质粒与siRNA转染25-26
• 2.2.3 Western Blot26
• 2.2.4 RNA提取和Real-time26-28
• 2.2.5 免疫共沉淀28
• 2.2.6 生物素标记实验与RNA pull down实验28-29
• 2.2.7 免疫荧光实验29
• 2.3 实验结果29-47
• 2.3.1 宿主细胞内MOV10蛋白促进EV71复制29-32
• 2.3.2 梯度过表达MOV10蛋白对EV71复制的影响32-33
• 2.3.3 MOV10结合于EV71的5'UTR区域33-37
• 2.3.4 MOV10可与EV71三叶草结构和IRES结构结合,并影响病毒复制37-42
• 2.3.5 MOV10蛋白的C端与N端对EV71复制具有不同影响42-43
• 2.3.6 MOV10在EV71感染后与TDP43,FUS以及HuR发生共定位43-45
• 2.3.7 EV71感染过程中宿主细胞内P小体以及MOV10所受影响45-47
• 2.4 讨论47-49
• 参考文献49-56
• 硕士在读期间科研成果56-57
• 致谢57-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李莉;钟海燕;樊茂;奎莉越;李惠英;张建英;;参与EV71复制的宿主因素hnRNP K、RTN3的分子作用机制研究进展[J];病毒学报;2015年02期

2 Megha Haridas Upadya;Jude Juventus Aweya;Yee-Joo Tan;;Understanding the interaction of hepatitis C virus with host DEAD-box RNA helicases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年11期

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本文编号：390591