脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞混合培养后成骨分化能力的研究

发布时间：2017-05-24 20:19

  本文关键词：脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞混合培养后成骨分化能力的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)和脂肪间充质干细胞(ADSC)共培养后对干细胞成骨能力的影响。方法:采用贴壁筛选法和酶消化发分别获得BMSC和ADSC,用流式细胞术进行鉴定。对两种细胞分别进行成骨、成脂肪、成软骨诱导,油红O染色鉴定成脂分化;碱性磷酸酶、茜素红染色鉴定成骨分化;成软骨诱导组诱导后由甲苯胺蓝染色鉴定,并用Q-PCR对SOX9、II型胶原等基因进行测定。而成骨诱导处理分为四组,A组:干细胞未诱导组;B组:BMSC成骨诱导组;C组:ADSC成骨诱导组;D组:BMSC与ADSC混合成骨诱导组(每组的细胞密度均为1.0×104/cm2D组BMSC/ADSC=1:1);上述四组分别采用Western-Blot检测OCN以及RUNX2等蛋白。另取Wistar大鼠20只,制作骨缺损模型,分为实验组与对照组,对照组为空白对照,骨缺损部位不植入任何材料,实验组将上述成骨诱导处理的4组细胞植入支架材料后种入大鼠骨缺损处,组织学方法检测缺损处成骨情况。结果:ADSC和BMSC两种细胞在在成脂诱导条件下诱导成脂肪细胞,油红O染色可见红色;成骨诱导条件下细胞成骨分化,碱性磷酸酶(ALP)以及茜素红染色可见片状红色;成软骨诱导条件下细胞成软骨分化,甲苯胺蓝染色可见蓝色。成骨诱导处理组中,B组和C组细胞中的OCN和RUNX2蛋白表达水平显著高于A组细胞(P0.05);B组细胞中的OCN和RUNX2蛋白表达高于C组(P0.05);D组细胞中的OCN和RUNX2蛋白表达较其它三组显著性升高(P0.01)。两种干细胞成软骨诱导后,SOX9、II型胶原等基因表达明显增高。将上述四组细胞植入材料种入体内后,分别于一月后、两月后取出材料进行组织学检查,发现实验组1月后均有骨小梁生成、2月后均有板状骨形成,但是成骨情况分别是混合组大于BMSC组大于ADSC组。结论:共培养后,两种细胞的成骨能力有所增强。成骨细胞植入支架材料后放入骨缺损模型大鼠体内,可形成骨小梁结构促进骨愈合,混合诱导的细胞成骨能力较单独诱导的强。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 脂肪间充质干细胞 流式细胞术 共培养 碱性磷酸酶 II型胶原
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 主要参考文献13-15
• 材料（资料、内容）与方法15-33
• 1 研究内容15
• 2 实验动物和耗材15-18
• 3 实验方法-原代细胞培养18-21
• 4 细胞的鉴定21-22
• 5 细胞的诱导分化22-23
• 6 细胞染色实验23
• 7 RT-PCR23-26
• 8 Western-blot检测26-33
• 结果33-37
• 讨论37-42
• 结论42-43
• 参考文献43-45
• 体内实验45-49
• 1 实验动物45
• 2 实验方法45
• 3 实验结果45-47
• 4 讨论47-48
• 参考文献48-49
• 综述49-58
• 参考文献54-58
• 作者简介及读研期间主要科研成果58-59
• 致谢59

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