携带EGFP基因的戊型肝炎病毒重组质粒的构建及其感染性的验证

发布时间：2017-05-29 23:05

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【摘要】：为了构建携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重组质粒,转染人肺癌细胞A549细胞验证其感染性,PCR法分两段扩增HEV全基因组序列和EGFP基因序列,将EGFP报告基因插入到HEV ORF2基因下游,并克隆到体外转录表达载体pGEM屮-7Zf(+)上。然后利用脂质体转染法将重组质粒转入A549细胞,24h后在荧光显微镜下观察EGFP的表达;转染72h后,利用免疫荧光法检测HEV ORF2蛋白的表达。转染7d后将发生病变的A549细胞收集作为接种物,接种A549细胞验证携带EGFP的HEV-EGFP重组病毒的感染性。结果显示经酶切和测序鉴定携带EGFP的HEV重组表达质粒pGEM-HEV-EGFP构建成功;EGFP基因与HEV在A549细胞中可融合表达;携带EGFP的HEV重组表达质粒转染A549细胞7d后出现病变,并且连续传代3代仍具有感染性。本研究成功构建了携带EGFP的HEV全基因组重组质粒pGEM-HEV-EGFP,并成功感染A549细胞,为进一步研究HEV的复制机制及致病机理奠定基础。
【作者单位】： 昆明理工大学医学院;中国医学科学院医学生物学研究所;大连雅立峰生物制药有限公司;云南省洱源县右所镇畜牧兽医站;
【关键词】： 戊型肝炎病毒(HEV) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 感染性
【基金】：国家自然科学基金(项目号:31360619;81660338) 云南省自然科学基金(项目号:2013FB032) 中国博士后科学基金(项目号:2014M562672;2015T81138)
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 3.大连雅立峰生物制药有限公司,大连116000;4.云南省洱源县右所镇畜牧兽医站,大理671200)戊型肝炎(Hepatitis E,HE)已成为一种全球性的疾病,戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是引发戊型肝炎的病原体,由HEV引起的病毒性肝炎每年大约2千万例。戊型肝炎在许多发展中国家已成

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