一株铜绿假单胞菌RNA噬菌体的分离和鉴定

发布时间：2017-06-13 20:11

  本文关键词：一株铜绿假单胞菌RNA噬菌体的分离和鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近几年来,由于抗生素在临床以及畜牧养殖业的大量使用,而新抗生素的开发少之又少,使得细菌的耐药性问题日益严峻,甚至出现了几乎无药可用的“超级细菌”,这给临床治疗带来了非常严重的挑战,尤其是多重耐药菌株的抗感染问题已经成为目前临床治疗的难点。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA),也被称为绿脓杆菌,是临床上常见的革兰阴性条件致病菌,在自然界中分布极为广泛,各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有存在。作为医院内感染的主要病原菌之一,铜绿假单胞菌对多种抗生素都具有耐药性,在此背景下,寻找抗铜绿假单胞菌感染的新的治疗方法十分必要。噬菌体是一类在自然界中广泛分布,专性感染以及裂解细菌的病毒。其基因数目较少,增殖速度较快又易于培养。1915年,噬菌体由Frederick W.T.首次发现,此后人们就尝试用噬菌体来治疗细菌性感染,但一直都未能取得根本性的突破。近几年来,由于细菌耐药性的问题日益严重,噬菌体治疗重新回归人们视野,并被认为是抗生素治疗之外的又一种抗感染手段。本文以一株可以分泌红色色素的铜绿假单胞菌临床分离株PAO38为宿主菌,从西南医院下水道污水中分离得到了一株可以将其裂解的RNA噬菌体,我们将其命名为PaP6。得到该噬菌体后,对其生物学特性进行了重点研究,包括其最佳感染复数、一步生长曲线、结构蛋白、氯仿敏感性以及宿主谱等。这些数据为今后对其进一步的深入研究、基因工程改造、噬菌体治疗等研究奠定了必要的基础,并且丰富了对噬菌体多样性的认识。研究内容及结果具体包括以下几个方面:1.以铜绿假单胞菌PAO38为宿主菌,从西南医院的污水中分离得到一株可以裂解PAO38菌株的噬菌体,命名为PaP6(Pseudomonas aeruginosa Phage 6)。电镜下观察发现PaP6有一个正多面体的头部,头部大小约为45 nm。2.提取噬菌体PaP6的基因组,电泳分析表明该基因组天然以三个节段存在。酶切分析表明,该基因组为双链结构,对DNAase不敏感,但对RNAase敏感,说明其为RNA噬菌体,且三个片段长度分别约为9 Kb、4.5 Kb和3.5 Kb,全基因组约17 kb。3.实验还测定了噬菌体PaP6的最佳感染复数(MOI)以及一步生长曲线。其MOI为0.1,噬菌体滴度达到了8.5×109 PFU。噬菌体PaP6感染宿主菌的潜伏期约是10 min,爆发期约为50 min,得出PaP6感染宿主菌PAO38的爆发量约为10。4.PaP6可以感染40.1%的铜绿假单胞菌临床分离株,是一株比较广谱的噬菌体。
【关键词】：铜绿假单胞菌 双链RNA噬菌体 囊病毒科噬菌体 生物学特性
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R378
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 英文摘要6-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-13
• 第二章 铜绿假单胞菌噬菌体PaP6的分离和鉴定13-21
• 2.1 宿主菌PAO38噬菌体PaP6的分离和鉴定13-21
• 第三章 噬菌体PaP6的生物学特性21-36
• 3.1 噬菌体PaP6最佳感染复数的测定21-23
• 3.2 噬菌体PaP6一步生长曲线的绘制23-26
• 3.3 噬菌体PaP6结构蛋白的分析26-30
• 3.4 噬菌体PaP6对氯仿敏感性的研究30-33
• 3.5 噬菌体PaP6宿主谱的研究33-36
• 全文总结36-37
• 全文讨论37-39
• 参考文献39-44
• 文献综述 噬菌体治疗铜绿假单胞菌感染的研究现状和前景44-62
• 参考文献54-62
• 攻读学位期间发表的论文62-63
• 致谢63

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本文编号：447510