绿色荧光蛋白基因转染示踪比格犬体内骨髓间充质干细胞分化

发布时间：2017-06-15 21:03

  本文关键词：绿色荧光蛋白基因转染示踪比格犬体内骨髓间充质干细胞分化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的运用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察骨组织工程中种子细胞的变化和转归。方法使用重组腺病毒(Ad-GFP)将GFP基因转染比格犬骨髓间充质干细胞(BMSC),倒置相差显微镜下观察BMSC形态、碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色情况;荧光显微镜下观察细胞GFP表达状况。待细胞标记成功后将其离心,接种于β-磷酸三钙(β-TCP)上,回植于比格犬胫骨内侧骨膜囊内,构建组织工程骨记为A组;单纯β-TCP植入对称胫骨内侧骨膜囊记为B组;单纯β-TCP植入皮下记为C组。术后2周取材,分别行组织学观察、免疫组化检测,同时激光共聚焦显微镜下观察GFP表达情况。结果体外成骨诱导实验显示,ALP染色以及茜素红染色阳性。组织学观察可见,A组新生骨组织以及新生血管均较B组明显,C组未见新生骨组织。免疫组化检测显示,A组Ⅰ型胶原、血小板内皮细胞黏附分子CD31染色阳性;B组Ⅰ型胶原、CD31染色部分阳性;C组未见阳性表达。免疫组化半定量检测显示,A、B两组Ⅰ型胶原、CD31定量有统计学差异(P0.05)。激光共聚焦显微镜观察结果显示,A组新生骨组织内可见GFP表达,B、C组未见GFP标记细胞。结论 BMSC是组织工程骨早期形成的重要来源,但周围成骨细胞并非新生骨组织主要来源;移植BMSC于骨膜下可促进新生血管形成。
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科;上海市骨科内植物重点实验室;
【关键词】： 骨组织工程 绿色荧光蛋白 骨髓间充质干细胞
【基金】：国家自然科学基金(81272132)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(BMSC)是造血微环境中的一种重要细胞成分,获取相对容易,在特定的理化环境和细胞因子诱导下,可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞等多种类型细胞,且免疫原性弱,是组织工程理想的种子细胞来源[1-4]。然而,新生组织工程骨的细胞来源是体外植入BMSC

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本文编号：453454