小鼠子宫特络细胞(Telocytes)对腹腔巨噬细胞体外活化效应的实验研究
本文关键词:小鼠子宫特络细胞(Telocytes)对腹腔巨噬细胞体外活化效应的实验研究,,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:目的:Telocytes(TCs)是一种普遍存在于人类和啮齿类动物器官和组织中的特殊间质细胞。近年来逐渐深入研究的结果显示,TCs可能通过细胞间连接来调节局部的免疫微环境。妇科疾病,诸如子宫内膜异位症、不孕症,均与免疫有密切关系,而TCs潜在的免疫调节作用,在妇科疾病中尚未见报道。本实验研究体外条件下,间接共培养的小鼠腹腔巨噬细胞(p MACs)在子宫TCs的刺激下产生的形态,活力以及分泌功能的变化,旨在了解子宫TCs在局部免疫环境调节中起到的作用以及潜在影响。方法:选取SPF级BALB/c小鼠用作TCs原代细胞培养和腹腔巨噬细胞的分离提取。1.过量麻醉处死小鼠,无菌条件下取小鼠子宫组织,用酶消化的方法提取TCs进行原代细胞培养。2.采用亚甲蓝染色,活细胞线粒体染色和免疫荧光染色(vimentin,CD34及c-kit)等方法鉴定并观察TCs细胞形态。3.显微镜下动态观察并拍摄照片,记录TCs细胞的运动及Tps(TCs细胞特有的极细长串珠状突起)的形态变化。4.流式细胞方法标记(vimentin及CD34)检测培养TCs细胞纯度。5.TCs传代并生长稳定后,加入不含血清的基础培养基,培养24 h,收集细胞上清,即Telocytes条件培养基(TCM)。6.无菌条件下,向小鼠腹腔内注射巯基乙醇酸盐,刺激腹腔巨噬细胞的产生。三天后用腹腔冲洗的方法提取小鼠腹腔巨噬细胞(pMACs)。7.用TCM培养pMACs作为实验组,空白培养基培养p MACs作为阴性对照组,空白培养基加脂多糖(LPS)培养pMACs作为阳性对照组,建立间接共培养模型。8.观察48h后巨噬细胞形态,用cck-8法测定巨噬细胞活性。巨噬细胞线粒体荧光染色,拍照记录并分析荧光强度。分别收集24h及48h培养细胞上清液,用elisa法检测相关细胞因子水平(inos,il-6,tnf-α,il1-r1,il-10,tgf-β1,il-1β,il-23α及il-18)。探讨pmacs受到tcs间接刺激后形态,活力及分泌功能的变化。结果:1.显微镜下小鼠子宫tcs具有典型的形态特点,胞体较小,但具有极为细长的胞质突起(tps),并且粗细交替。亚甲蓝染色下能更清楚地观察细胞核和tps形态。2.荧光显微镜下观察,tcs呈vimentin阳性,cd34阳性和c-kit阴性表达。3.动态拍摄记录可观察到tcs细胞胞体明显的移动和变化,胞体迁移过程中tps逐渐延长。4.流式细胞方法检测培养细胞,vimentin和cd34双阳性细胞占90%以上。5.tcm培养pmacs后,pmacs发生了明显的形态改变,细胞伸出伪足,胞膜粗糙,胞浆内充满颗粒感,但未发生皱缩和死亡,细胞间隙被变形的细胞伪足填满。而阴性对照组细胞形态变化不明显,lps刺激组细胞在lps作用下已开始发生细胞皱缩和死亡,细胞间隙明显增大。6.cck-8法测定细胞活性后,实验组较阴性对照组活性明显升高(p0.05),相较lps刺激组无明显差别(p0.05)。7.巨噬细胞线粒体荧光染色,使用荧光显微镜附带软件分析荧光强度。阴性对照组9732.27?1996.87;阳性对照组:21939.16?2159.58;tcm培养组:29478.73?3652.01,相较于阴性对照组及阳性对照组均有统计学差异(p0.05)。8.细胞因子定量测定:在受到tcs间接刺激的pmacs培养上清液中,inos和il-6在24和48小时都有显著增高(p0.05)。tnf-α,il1-r1和il-10,虽然升高不显著,但48小时数据仍有统计学差异(p0.05)。tgf-β1,il-1β,il-23α和il-18的数据结果在三组中无统计学差异(p0.05)结论:原代培养的子宫tcs在间接共培养条件下对pmacs产生了明显的活化作用,使pmacs的形态发生了明显的改变,细胞活力有明显的提高,分泌的部分免疫相关细胞因子也有明显增加。推测子宫tcs在组织器官的免疫调节中可以起到激活和调节的作用,在局部的免疫微环境中扮演着重要角色。这一实验结果使利用TCs的免疫辅助功能治疗妇产科疾病有了可能。
【关键词】:小鼠 子宫 特络细胞 Telocytes 巨噬细胞 活化 免疫调节 免疫反应 细胞因子 酶 不育 生育障碍
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R392
【目录】:
- 中文摘要4-7
- Abstract7-11
- 前言11-13
- 实验材料与方法13-19
- 结果19-28
- 讨论28-33
- 总结33-34
- 参考文献34-40
- 综述40-51
- 参考文献48-51
- 中英文对照缩略词表51-53
- 攻读硕士研究生期间所获成绩53-54
- 研究生期间参与的科研基金项目54-55
- 致谢55-57
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