玉竹多糖对H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐剂效力研究

发布时间：2017-06-24 01:04

  本文关键词：玉竹多糖对H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐剂效力研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：流感病毒(influenza virus)一直困扰着人类,它每年造成季节性流感,新亚型的出现还可能引起爆发性全球大流行。自1997年香港首次发现H5N1禽流感病毒直接感染人类以来,已陆续发现有多个亚型禽流感病毒感染人类。2013年3月在我国首次出现H7N9禽流感病毒感染人,到2016年1月,中国共有698人感染,281人死亡,致死率达到40.3%约为2009年甲流的60倍。接种疫苗是预防和控制流感最有效的方法。流感裂解疫苗通常采取肌肉注射的方法接种,然而这种策略主要提供系统性免疫应答。粘膜免疫不仅能诱导系统性免疫应答还能诱导局部粘膜免疫应答。然而,由于“异己”物质极易在粘膜腔道被降解或排除,疫苗的免疫原性会大大降低。添加佐剂可以改善粘膜免疫应答的效果。目前尚没有安全有效的粘膜佐剂应用于临床。在本研究中,我们探讨了玉竹多糖(Polygonatum odoratun polysaccharide,POP)作为粘膜佐剂对H7N9流感病毒裂解疫苗的免疫增强效果。以6-8周龄Balb/c小鼠为动物模型,采用单次滴鼻免疫的方法接种小鼠。首先探讨不同剂量(0.1、0.33、1和3μg)的H7N9流感裂解疫苗单独免疫(即不添加佐剂)对小鼠的粘膜免疫保护效果。根据该实验结果我们选择0.33μg疫苗剂量来考察POP的佐剂效果。将0.33μg裂解疫苗单独或添加不同剂量(400、600、800、1000和1200μg)的POP免疫小鼠,不免疫组和POP单独免疫组(采用最大剂量)小鼠作为对照。免疫3周后取小鼠血清和鼻洗液,用ELISA方法检测小鼠血清中的疫苗特异性IgG、Ig G抗体亚类IgG1和IgG2a、鼻洗液中sIgA抗体滴度;用血凝抑制试验(HI)检测HI抗体滴度。免疫3周后(在取血后的第二天),用致死量(5LD50)同源病毒攻击小鼠,在攻毒后21内连续观察并记录小鼠的体重以及存活情况,并在攻毒3天后每组取3只小鼠,检测其肺洗液中的病毒滴度。通过上述指标评价POP对H7N9流感裂解疫苗经粘膜免疫的免疫增强效果。结果表明,抗体滴度(能检测到的)随佐剂剂量的增加有加强的趋势,但达到1200μg时,抗体滴度反而下降。当POP剂量为1000μg时,产生的各类抗体水平达到最大值,与未加佐剂的单独疫苗组比较有显著差异。IgG抗体亚类检测表明,与未添加佐剂组相比,添加佐剂组的IgG1抗体滴度均有增加,而IgG2a抗体滴度显著下降或只略有升高,1000μg剂量组的IgG1/IgG2a比值明显大于未添加佐剂组,说明POP是一种TH2型佐剂,诱导偏向Th2型的免疫应答。在保护效果方面,当POP剂量达到1000μg时保护效果最好,小鼠存活率达到75%,与疫苗单独免疫组和对照组(存活率均为0%)相比有显著差异。本研究结果表明,POP能够增强H7N9流感裂解疫苗粘膜免疫的免疫保护效果,可以考虑作为粘膜佐剂做进一步的研究。
【关键词】：H7N9 粘膜免疫 疫苗 玉竹多糖
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 前言12-18
• 1 流感病毒12-14
• 1.1 流感病毒的生物学特性12-13
• 1.2 感染人的H7N9禽流感病毒13-14
• 2 流感灭活疫苗粘膜免疫14-15
• 2.1 流感病毒灭活疫苗14
• 2.2 粘膜免疫途径14-15
• 3 疫苗佐剂15-17
• 3.1 疫苗佐剂的作用机制和种类15-16
• 3.2 流感疫苗粘膜佐剂的研究16
• 3.3 天然多糖作为疫苗佐剂16-17
• 4 本研究的内容和意义17-18
• 第二章 玉竹多糖对H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐剂效应的研究18-40
• 1 引言18-19
• 2 实验材料及方法19-28
• 2.1 病毒株、疫苗以及实验动物19
• 2.2 主要试剂及溶液配方19-22
• 2.2.1 病毒传代以及攻毒实验所需试剂及溶液19-20
• 2.2.2 动物免疫所需试剂及溶液20
• 2.2.3 酶联免疫吸附反应（ELISA）检测抗体所需试剂及溶液20-21
• 2.2.4 HI（血凝抑制）实验所需试剂及溶液21
• 2.2.5 细胞实验所需试剂及溶液21-22
• 2.3 实验用到的仪器22-23
• 2.4 实验方法23-28
• 2.4.1 NIBRG-267(H7N9)病毒株在小鼠体内的传代扩增23-24
• 2.4.2 NIBRG-267（H7N9）对SPF级BALB/c小鼠LD50的测定24
• 2.4.3 动物免疫24-25
• 2.4.4 样本的采集25-26
• 2.4.5 攻毒实验26
• 2.4.6 抗体的检测26-27
• 2.4.7 肺病毒滴度的测定27-28
• 2.4.8 统计分析28
• 3 实验结果28-36
• 3.1 NIBRG-267（H7N9）重组病毒株对SPF级BALB/c小鼠半数致死量（LD50）的测定28-29
• 3.2 H7N9流感病毒裂解疫苗经粘膜免疫对小鼠的保护效果29-30
• 3.3 玉竹多糖对H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫佐剂效力的研究30-36
• 4 讨论36-40
• 结语40-42
• 参考文献42-46
• 缩写表46-47
• 读研期间文章发表和录用情况47-48
• 致谢48

  本文关键词：玉竹多糖对H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐剂效力研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：476710