肠铁转运系统在细菌侵染肠上皮细胞中的作用

发布时间：2017-06-27 07:16

  本文关键词：肠铁转运系统在细菌侵染肠上皮细胞中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：营养免疫是宿主抵抗微生物的一个重要防御屏障。微生物侵染宿主时,宿主能够限制微生物利用营养。研究表明,营养免疫的重要方式之一是对金属离子如铁、锌和锰的限制。铁作为微量元素之一,在生物的生命活动中发挥着尤为重要的作用。食物铁主要通过十二指肠上皮细胞吸收。病原微生物感染生物体的重要部位为肠道。哺乳动物肠上皮细胞铁吸收转运体系主要由三个基因DMT1、Ftn和Fpnl构成,分别参与铁吸收、胞内贮存和释放。在肠上皮细胞中,病原细菌侵染后,是否会影响DMT1、Ftn和Fpnl基因的表达,且肠上皮细胞铁吸收转运体系相关基因在细菌侵染细胞中的作用目前还不清楚。本论文主要围绕细菌侵染人类肠上皮细胞时,肠铁吸收转运体系是否在抵抗细菌侵染中的作用进行研究。我们的研究结果表明,肠上皮细胞的铁吸收转运体系的相关基因被沉默后,导致Caco-2细胞对病原细菌沙门氏菌(Salmonella typhimurium)抵抗降低,表明肠上皮细胞铁吸收体系在病原细菌沙门氏菌侵染宿主中发挥着重要作用。同时,我们还发现,沙门氏菌侵染后导致DMT1、Ftn和Fpnl的表达升高；并且胞内菌沙门氏菌和胞外菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) PA14侵染细胞对三个基因表达水平影响不同,铜绿假单胞菌PA14侵染细胞时三个基因DMT1、Fpnl和Ftn的表达量无显著差异。综上所述,我们的研究结果表明：哺乳动物肠道上皮细胞的铁吸收转运体系在细菌侵染宿主时发挥重要作用。
【关键词】：铁吸收转运体系 肠上皮细胞 病原细菌 侵染
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 绪论9-22
• 一、研究的宿主与病原菌简介9-12
• 1.1 Caco-2人类肠道上皮细胞9
• 1.2 沙门氏菌简介9-11
• 1.3 沙门氏菌与相关疾病11-12
• 二、肠道上皮细胞铁吸收转运体系研究进展12-14
• 2.1 肠上皮细胞铁吸收转运体系的组成12-13
• 2.2 肠道在天然免疫中的地位13
• 2.3 肠上皮细胞铁吸收转运体系相关基因的表达受铁含量水平的调控13-14
• 三、铁在天然免疫和细菌侵染中的重要性14-22
• 3.1 天然免疫中铁的作用14-16
• 3.2 细菌侵染中铁的重要性16-17
• 3.3 病原菌获得铁的方式17-19
• 3.3.1 胞外菌17
• 3.3.2 胞内菌17-19
• 3.3.3 真菌19
• 3.4 铁的新陈代谢与铁蛋白的作用19-22
• 3.4.1 铁输出蛋白19-20
• 3.4.2 铁调素20
• 3.4.3 转铁蛋白受体20
• 3.4.4 Toll-like receptors20-22
• 第二章 实验材料和方法22-35
• 一、实验仪器、试剂、培养基22-25
• 1.1 主要仪器22
• 1.2 主要试剂22-23
• 1.3 主要试剂盒23
• 1.4 主要培养基及配制方法23
• 1.5 常用溶液的配制23-25
• 二、实验材料25
• 2.1 实验所用到的细胞25
• 2.2 实验菌株25
• 2.3 实验器具25
• 三、实验方法25-35
• 3.1 细胞复苏25
• 3.2 细胞培养25-26
• 3.3 细胞消化26
• 3.4 细胞冻存26
• 3.5 siRNA沉默26-28
• 3.6 细胞稳定转染28
• 3.7 MOI的选取方法28-29
• 3.8 细菌CFU29
• 3.9 细菌OD值的测定29
• 3.10 细胞以及细菌计数29-30
• 3.11 细胞MTT测定30
• 3.12 细胞侵染30-31
• 3.13 细胞RNA提取31
• 3.14 反转录cDNA的合成31-32
• 3.15 定量QPCR32-34
• 3.16 细胞基因组提取34-35
• 第三章 实验结果35-46
• 一、胞内病原菌沙门氏菌可以激活Caco-2肠上皮细胞铁吸收转运体系35-37
• 二、胞外病原菌铜绿假单胞菌不能激活Caco-2肠上皮细胞铁吸收转运体系37-40
• 三、siRNA干扰Caco-2肠上皮细胞铁吸收转运体系的相关基因40-41
• 四、Ftn、Fpn1限制Caco-2细胞中沙门氏菌的增殖41-43
• 五、肠上皮细胞铁吸收转运体系在沙门氏菌侵染Caco-2细胞中发挥重要作用43-46
• 第四章 讨论46-48
• 参考文献48-54
• 致谢54-55

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 石辛甫,高杰英;肠上皮间淋巴细胞的研究进展[J];免疫学杂志;1998年04期

2 曾小川，，汪维伟;胚胎肠上皮的组织发生机制之研究进展[J];重庆医科大学学报;1998年03期

3 Trier J S ,杨希山;肠M细胞的结构和功能[J];国外医学(消化系疾病分册);1992年03期

4 周静,王杉,叶颖江,杨q

本文编号：488892