丹酚酸B对糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮功能的保护作用及机制研究

发布时间：2017-07-05 13:15

  本文关键词：丹酚酸B对糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮功能的保护作用及机制研究

  更多相关文章： 丹酚酸B 血糖波动 内皮功能障碍 氧化应激 糖尿病

【摘要】：目的:观察丹酚酸B对糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮功能的影响,并探讨其可能机制。方法:1.动物实验:健康雄性SD大鼠50只,随机分为对照组和糖尿病模型组,对照组饲以普通饲料,糖尿病模型组大鼠以高糖高脂饲料喂养。4周后禁食12 h,糖尿病模型组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40 mg·kg-1建立糖尿病大鼠模型。将成模大鼠(空腹血糖≥13.9 mmol/L)随机分组4组,即持续高糖组(SHG)、波动高糖组(IHG)、丹酚酸B高、低剂量组(160 mg·kg-1·d-1及80mg·kg-1·d-1)。波动高糖组与丹酚酸B治疗组在此基础上每日2次给予胰岛素或葡萄糖建立糖尿病血糖波动模型,持续高糖组与对照组以相同方式给予同体积生理盐水。丹酚酸B组每天灌胃给药1次,期间每周1次测一日内五点血糖水平用于评价血糖稳定性,每2周测定一次空腹血糖,连续给药6周。于末次给药后进行口服糖耐量(OGTT)实验,腹主动脉取血,比色法检测定血清总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(GHb)水平;ELISA法测定空腹胰岛素(F-INS)含量,计算胰岛素抵抗指数(IR)和胰岛素敏感指数(ISI);离体血管环灌流法观察主动脉舒张功能;HE染色观察主动脉病理学变化;免疫组化法检测主动脉VCAM-1及NF-κB蛋白表达水平;比色法测定血清与主动脉超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)及丙二醛(MDA)水平和主动脉Caspase-3活性;TUNEL染色法检测血管内皮细胞凋亡水平;Western blot法测定血管eNOS活化水平及NOX4、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。2.HUVECs实验:HUVECs与丹酚酸B(1×10-5,10-6,10-7mol/L)孵育24 h后暴露于波动高糖(5.5 mmol/L 12 h,33.3mmol/l12h)72h,对照组(5.5mmol/l)与持续高糖组(33.3mmol/l)葡萄糖浓度维持不变。mtt法测定huvecs活力,比色法测定no水平、细胞t-aoc、mda及caspase-3活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平,荧光探针dcfh-da法观察细胞内活性氧(ros)水平,westernblot法检测enos磷酸化水平和nox4、bax、bcl-2蛋白表达水平。结果:1.动物实验:(1)血糖波动6周后,糖尿病大鼠的平均血糖水平(mbg)、血糖水平标准差(sdbg)及最大血糖波动幅度(lage)值均明显升高(p0.01);与持续高糖组比较,糖尿病血糖波动模型大鼠sdbg、lage值明显增高,mbg值降低(p0.01)。(2)丹酚酸b可明显降低糖尿病血糖波动模型大鼠空腹血糖和血清总胆固醇水平(p0.05或p0.01),降低糖化血红蛋白含量(p0.05),升高胰岛素水平(p0.05),改善胰岛素抵抗并提高胰岛素敏感指数(p0.05)。(3)丹酚酸b可有效减轻糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮细胞损伤,抑制nf-κb及vcam-1表达(p0.05),改善内皮依赖性血管舒张功能(p0.05或p0.01)。(4)丹酚酸b能显著提高enos磷酸化水平(p0.05或p0.01),增加no合成(p0.05或p0.01)。(5)丹酚酸b能明显抑制糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮细胞凋亡,下调bax蛋白表达,上调bcl-2蛋白表达水平(p0.05或p0.01),降低caspase-3活性(p0.05或p0.01)。(6)丹酚酸b能显著提高主动脉sod活性和总抗氧化能力(p0.05或p0.01),降低nox4蛋白表达和丙二醛(mda)水平(p0.05或p0.01)。2.huvecs实验:(1)丹酚酸b明显抑制波动高糖诱导的huvecs凋亡,增强细胞活力,上调bcl-2、下调bax蛋白表达并降低caspase-3活性(p0.05或p0.01)。(2)丹酚酸b可明显提高enos活性,增强no合成(p0.05或p0.01)。(3)丹酚酸b可明显提高huvecs总抗氧化能力,抑制波动高糖诱导的huvecs细胞内nox4蛋白表达,降低活性氧和mda水平(p0.05或p0.01)。结论:1.丹酚酸b对糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮功能障碍具有明显改善作用;2.丹酚酸b改善血管内皮功能障碍与激活enos/no途径、增加no生成及调节bcl-2/bax蛋白平衡、降低caspase-3活性、进而抑制血管内皮细胞凋亡有关;3.丹酚酸B改善糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮功能障碍与增强抗氧化能力、改善氧化应激状态有关。
【关键词】：丹酚酸B 血糖波动 内皮功能障碍 氧化应激 糖尿病
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-17
• 第一部分 丹酚酸B对糖尿病血糖波动模型大鼠血管内皮功能的改善作用17-52
• 1. 研究内容17
• 2. 材料与方法17-27
• 3. 结果27-45
• 4. 讨论45-51
• 5. 小结51-52
• 第二部分 丹酚酸B对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响52-65
• 1. 研究内容52
• 2. 材料与方法52-56
• 3. 结果56-62
• 4. 讨论62-64
• 5. 小结64-65
• 结论65-66
• 参考文献66-71
• 综述 糖尿病动脉粥样硬化发病机制及药物治疗研究进展71-86
• 参考文献79-86
• 作者简介及读研期间主要科研成果86-87
• 致谢87

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本文编号：522117