一种单抗制品理论消光系数与实验确证结果的比较

发布时间：2017-07-06 18:25

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【摘要】：目的本实验通过3种实验方法对1种单抗的消光系数进行实验确证并与理论消光系数进行比较研究。方法根据氨基酸一级序列,计算出单抗在280 nm处的理论摩尔消光系数,通过质谱确定单抗相对分子质量,计算出理论消光系数;分别用3种方法测定单抗的蛋白质浓度,根据朗伯-比尔定律c=A/EL计算实验消光系数。方法一为利用尿素变性蛋白测定其非折叠状态(变性状态)的实验消光系数,计算得出折叠状态(天然状态)的消光系数;方法二通过酸水解蛋白,结合Acc Q Fluor试剂盒利用HPLC对蛋白进行准确定量,计算该抗体的实验消光系数;方法三通过酸水解蛋白,利用氨基酸序列分析仪对蛋白进行准确定量,计算蛋白的实验消光系数。结果理论消光系数E280为1.453 m L·mg-1·cm-1;3种实验方法确定的单抗消光系数分别为(1.442±0.009)、(1.529±0.032)、(1.458±0.019)m L·mg-1·cm-1,均值为(1.477±0.044)m L·mg-1·cm-1,RSD=2.979%(n=9)。研究结果显示,该单抗的理论消光系数与实验消光系数的差异较小(0.069%~7.708%)。结论本实验运用3种方法确证单抗的实验消光系数,所建立的消光系数测定和验证方法可用于抗体药物蛋白含量的测定。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室;
【关键词】： 单克隆抗体 蛋白质含量 消光系数
【基金】：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2014ZX09304311-001) 中国食品药品检定研究院学科带头人培养基金(2015X6)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 蛋白质含量的准确测定对蛋白药物的表征、理化及活性分析等均十分重要,迄今为止,多种测定方法已被应用于蛋白的含量测定中,如凯氏定氮法、Lowry法、Bradford、紫外吸收法等[1-7]。对于高度纯化的蛋白质,如单抗制品,紫外吸收法由于其相对准确的定量、操作简单等优点应用最为广

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本文编号：527339