狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备

发布时间：2017-07-13 19:09

  本文关键词：狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备

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【摘要】：为表达狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基质蛋白(M)蛋白,进而制备多克隆抗体。本研究以狂犬病病毒BD06株RNA为模版,通过RT-PCR扩增M蛋白基因全序列,将其插入质粒pFastbac I中,获取的重组质粒pFastbac I-M,经酶切鉴定后,转化到DH10Bac E.coli感受态中,以获取重组穿梭质粒Bacmid-M。用lipofectamine2000介导Bacmid-M转染Sf9细胞获取重组杆状病毒AcMNPV-M。用抗His标签的单体、犬抗RV阳性血清及兔抗RV阳性血清通过Western-Blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,用Western-Blot和FAVN试验鉴定多克隆抗体的反应原性及其病毒中和效价。结果表明:(1)利用杆状病毒表达系统成功的表达了大小约为25kD的重组M蛋白;(2)重组M蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;(3)制备的多克隆抗体与狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能发生特异性反应,但其无病毒中和能力。本研究完成了重组M蛋白的表达、纯化并制备了其多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了物质基础。
【作者单位】： 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;
【关键词】： 狂犬病病毒 基质蛋白 杆状病毒 表达 纯化 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(31472176)
【分类号】：R373
【正文快照】： 狂犬病是一种古老的传染病,该病主要引起人类以及温血动物的急性致死性脑脊髓炎,并以恐水,精神沉郁,暴躁不安,出现攻击或其他反常行为,进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征的一种人兽共患病传染病,致死率几乎100%。至今,世界上每年仍约有50 000人死于狂犬病。给人类的生命健康

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