BMP-4对大鼠骨髓间充质干细胞与神经干细胞共培养转归影响的实验研究

发布时间：2017-07-17 07:09

  本文关键词：BMP-4对大鼠骨髓间充质干细胞与神经干细胞共培养转归影响的实验研究

  更多相关文章： 共培养 骨形态发生蛋白 骨髓间充质干细胞 分化 神经干细胞 存活

【摘要】：目的探索骨形态生发蛋白4(BMP-4)对经过与大鼠骨髓间充干细胞(MSCs)共同培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的分化和存活的影响,为细胞移植治疗脊髓损伤提供进一步的理论依据。方法提取新生24小时以内SD大鼠的幼鼠的大脑组织,采用无血清培养基培养7天,与从SD大鼠股骨骨髓中提取并经贴壁梯度培养后的骨髓间充质干细胞建立MSCs与NSCs共培养模型,在共同培养体系中加入BMP-4,利用流式细胞仪检测经Annexin V凋亡试剂盒处理后NSCs的存活率,使用细胞免疫荧光染色技术对分化后的NSCs进行免疫荧光染色并统计NSCs分化后的特异性蛋白MBP表达阳性的少突胶质细胞、神经元特异性蛋白MAP-2及特异性蛋白GFAP表达阳性的星形胶质细胞的表达情况。然后提取分化后细胞的总蛋白,行Western blot免疫印迹法鉴定NSCs分化后的少突胶质细胞特异性蛋白MBP、星形胶质细胞GFAP及神经元特异性蛋白MAP-2的表达情况,计算NSCs的存活率和分化率,进行数据统计分析后明确BMP-4对共培养后NSCs的存活及分化的影响。结果(1)原代培养三代后的骨髓间充质干细胞可见贴壁细胞呈梭形、螺旋状,形态大体一致,原代培养的神经干细胞可见大量悬浮生长的神经干细胞球,经过共同培养后神经干细胞可定向分化为少突胶质细胞、星形胶质细胞及神经元细胞。(2)利用H2O2制作细胞凋亡模型,将共培养后的神经干细胞分为4组分别为空白对照组、H2O2组、H2O2+共培养组及H2O2+共培养+BMP-4组。各组均采用Annexin V-PI细胞凋亡试剂盒,利用流式细胞术测定诱导凋亡后的神经干细胞的存活率。经流式细胞术检测分析可见共培养后的神经干细胞存活率明显提高,但在共培养体系中加入BMP-4后细胞存活率出现一定程度的下降,经方差分析显示,差异有统计学意义(F=29.373,P0.05)(3)BMSCs与NSCs共培养后分为两组即空白对照组和BMP-4组,培养7天后可见细胞形态上已出现了明显的分化,光镜下观察发现示细胞球向周边呈放射状生长,细胞间交织紧密,细胞间隙较窄。细胞免疫荧光染色可见GFAP阳性的星形胶质细胞、MAP-2表达阳性的神经元细胞以及MBP表达阳性的少突胶质细胞(4)提取细胞分化后的总蛋白,测定蛋白浓度后确定WB的上样量测定神经干细胞分化后GFAP、MAP-2、MBP的表达量,统计数据发现实验组中GFAP的表达量高于对照组(t=9.638,P0.05),MBP的表达量明显低于对照组(t=4.902,P0.05),MAP-2的表达无明显差异不具有统计学意义(t=0.71,P0.05)。结论BMP-4阻碍了MSCs促进NSCs的有效分化的效应。
【关键词】：共培养 骨形态发生蛋白 骨髓间充质干细胞 分化 神经干细胞 存活
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中英文词汇对照表5-6
• 摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-12
• 材料与方法12-22
• 结果22-30
• 讨论30-33
• 结论33-34
• 参考文献34-38
• 附录38-39
• 致谢39-40
• 综述40-49
• 参考文献46-49

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本文编号：552426