结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素的原核表达及其在结核病血清学诊断中的应用

发布时间：2017-08-06 07:22

  本文关键词：结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素的原核表达及其在结核病血清学诊断中的应用

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【摘要】：目的原核表达与纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素结合血凝黏附素(heparin-binding haemagglutinin adhesion,HBHA),并初步评估其在结核病血清学诊断中的价值。方法采用PCR法从M.tb H37Rv基因组中扩增hbha基因,克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28ah,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组HBHA(r HBHA)蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,Western blot法分析其抗原特异性。收集71例确诊的结核病患者和30名健康体检者血清,采用ELISA法检测血清中的抗HBHA Ig A、Ig G抗体水平,并以ESAT-6、Ag85A作为对照抗原,评估r HBHA在结核病血清学诊断中的价值。结果重组表达质粒p ET-28ah经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化,可得到高纯度的r HBHA蛋白;纯化的r HBHA蛋白可与小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性结合;结核病患者(TB)组血清中抗r HBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特异性Ig G水平均显著高于健康对照(HC)组(P0.05),且TB组的r HBHA抗原特异性Ig A水平也显著高于HC组(P0.05),而两组间ESAT-6、Ag85A抗原特异性Ig A水平差异无统计学意义(P0.05);ROC曲线分析显示,r HBHA抗原检测Ig A的诊断效能较好,曲线下面积为0.711,其他两种对照抗原ESAT-6、Ag85A的Ig A诊断效能一般,曲线下面积分别为0.512和0.531。结论 r HBHA抗原用于结核病的诊断效能较好,可作为结核病血清学诊断的备选抗原之一。
【作者单位】： 温州医科大学检验医学院生命科学学院;上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心;
【关键词】： 结核分枝杆菌 肝素结合血凝黏附素 免疫学诊断
【基金】：国家“十二五”重大传染病专项(2013ZX10003007-003) 国家自然科学基金项目(81273328,31170876) 上海市科委医学引导类项目(134119a5200) 上海市卫生局级课题青年项目(20124Y090)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 2.上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心,上海201508结核病(tuberculosis,TB)主要是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)通过呼吸道感染所致,目前仍为全球第二大传染病,严重威胁着人类公共卫生健康。据统计,全球每年约有860万新发病例,每年因结核病死亡的人数约

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