伯氏疏螺旋体诱导大鼠类风湿关节炎模型的建立及类风湿关节炎与TNFAIP3基因的关联研究

发布时间：2017-08-11 04:01

  本文关键词：伯氏疏螺旋体诱导大鼠类风湿关节炎模型的建立及类风湿关节炎与TNFAIP3基因的关联研究

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【摘要】：背景：类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一类慢性炎性自身免疫性疾病,主要以滑膜增生,关节疼痛,关节肿胀,关节软骨及骨质破坏为特征,病变主要累及双手近端指间关节,也可发生于腕、足等小关节,病变呈对称性分布。其发病机制至今仍未明确,一般认为其发病和遗传、感染、自身免疫及环境因素相关。淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及滑膜细胞等多种炎症细胞介导的异常细胞免疫、体液免疫,导致关节局部和全身的免疫功能紊乱,细胞因子如肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α, TNF-α)、白介素-1p(interleukin-1, IL-1β)、白介素-6 (interleukin-1, IL-6)、白介素-17(interleukin-17, IL-17)等在关节炎症的发生、发展过程中扮演着重要角色。RA的动物模型主要用于研究RA的发病机制和治疗途径。目前研究RA的动物模型有多种,最主要的是佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)和胶原性关节炎(collagen type II induced arthritis, CIA)。伯氏疏螺旋体是莱姆病的病原体,中期和晚期莱姆病以莱姆关节炎、神经系统损害及心脏病变为主要表现,其中莱姆关节炎发生率最高,约半数以上的患者有关节症状,多进展为慢性炎性关节炎并可致残。莱姆关节炎在临床及病理表现上与RA和反应性关节炎有许多相似处,因而可将其用于关节炎发病机制的研究。目前,常被用作莱姆病动物模型的大白鼠为近交系Lewis、CD-1、SD等品系。其中,Lewis和CD-1品系比较敏感,感染后可发生心肌炎及关节炎。莱姆关节炎动物模型的制作是通过向实验动物皮下或腹腔注射伯氏疏螺旋体活菌诱导关节炎。研究发现,在宿主感染螺旋体后,螺旋体数量迅速下降。在螺旋体数量下降的同时关节炎也逐渐减轻,只有再次感染螺旋体机体才会出现较强的免疫应答并出现破坏性关节炎。Gondolf.KB等研究证实,通过向大鼠关节腔内注射丁醇萃取的水溶性的伯氏疏螺旋体多种外膜表面蛋白的复合蛋白,可以诱发大鼠慢性关节炎。以上研究说明,伯氏疏螺旋体全菌蛋白的整体或部分可能诱导大鼠关节炎,为了探索这种可能性,本实验使用伯氏疏螺旋体全菌蛋白联合不完全弗氏佐剂免疫雄性Lewis近交系大鼠,尝试建立一种新的RA动物模型。目的：应用伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)全菌蛋白(Whole cell protein)首次皮内注射再次腹腔注射免疫Lewis大鼠诱导类风湿关节炎模型并探讨该模型发病机制。方法：将雄性Lewis大鼠随机分为螺旋体低剂量组、螺旋体中等剂量组、螺旋体高剂量组、完全弗氏佐剂组、不完全弗氏佐剂组及生理盐水组。采用关节炎指数和组织病理学的方法观察大鼠的发病程度和病理特点。双抗体夹心ELISA法检测血清RF、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17含量。免疫组织化学法检测滑膜MMP3、TIMP1的表达。结果：伯氏疏螺旋体诱导的大鼠关节炎模型,于造模后第16天,螺旋体高剂量组大鼠造模率66.67%。病变关节病理显示关节滑膜增生,炎细胞浸润,软骨组织及骨组织侵蚀,呈典型的关节炎病变。螺旋体高剂量组成模大鼠与完全弗氏佐剂组比较,大鼠血清细胞因子水平、关节炎指数、关节组织病理学评分及MMP3和TIMP1的免疫组化IHS评分差异无统计学意义(P均0.05)；与不完全弗氏佐剂和生理盐水组比较,大鼠血清细胞因子水平、关节炎指数、关节组织病理学评分及MMP3和TIMP1的免疫组化IHS评分差异有统计学意义(P均0.05)。结论：1.足跖皮内注射6mg/ml白氏疏螺旋体全菌蛋白0.1ml,两周后再次以相同剂量相同浓度腹腔注射加强免疫1次,可诱导Lewis大鼠类风湿关节炎模型,造模率可达66.67%。2.伯氏疏螺旋体全菌蛋白诱导大鼠类风湿关节炎模型的血清RF、TNF-α IL-1β、IL-6和IL-17水平升高。3.伯氏疏螺旋体全菌蛋白诱导大鼠类风湿关节炎模型的滑膜MMP3表达增加,TIMP1表达减少。第二部分类风湿关节炎与TNFAIP3基因多态性关联研究的Meta分析中文摘要背景：类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种慢性进行性自身免疫性疾病,环境因素和遗传因素在疾病的发生和发展过程中共同起作用,遗传因素可能是RA的发病基础。近年肿瘤坏死因子诱导蛋白3 (tumor necrosis factor alpha induced protein 3, TNFAIP3)基因被认为是HLA以外与类风湿关节炎关联性极强的一个易感基因。其编码的泛素化蛋白A20通过调节核因子(Nuclear factor kappa B, NF-kappaB/NF-eB)、干扰素调节因子3 (Interferon regulate factor 3, IRF3)及肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)诱导凋亡信号转导通路上多个部分的泛素化状态,包含肿瘤坏死因子受体(TNF receptor)及Toll样受体(Toll-like receptor)和Nod样受体(Nod-like receptor)等,限制并终止炎症反应。2007年威康信托基金会病例控制协会(WTCCC)全基因组研究发现,肿瘤坏死因子诱导蛋白3基因rs6920220和rs10499194位点基因多态性与类风湿关节炎有关联,此后有关TNFAIP3的研究日益增多,但研究结论不尽一致。目的：探讨类风湿关节炎(RA)与TNFAIP3基因多态性的关联性。方法：选择TNFAIP3基因6个位点(rs692022、rs2230926、rs5029937. rs10499194、rs2327832、rs13207033),检索已发表的RA与TNFAIP3基因多态性关联研究的文献进行Meta分析。结果：18篇文献共纳入27554例RA患者和39664例正常对照。综合分析显示,TNFAIP3基因rs6920220、rs2230926、rs5029937位点基因多态性与RA存在关联性(P0.01, P=0.03, P0.01); TNFAIP3基因rs2327832和rs13207033位点基因多态性与RA无关联性(P=0.27,P=0.05)。亚组分析显示,白种人TNFAIP3基因rs10499194位点基因多态性与RA存在关联性[OR=0.87(0.80-0.95),P0.01]；黄种人TNFAIP3基因rs10499194位点基因多态性与RA存在关联性[OR=1.28 (1.13～1.46), P0.01]。结论：Meta分析显示,rs2230926. rs5029937位点基因多态性与RA存在关联性,rs10499194位点基因多态性与RA的关联有种族差异。
【关键词】：全菌蛋白 伯氏疏螺旋体 关节炎 类风湿 模型 动物 自身免疫 关节炎 类风湿关节炎 肿瘤坏死因子诱导蛋白3 基因多态性 Meta分析
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R593.22;R-332
【目录】：

• 第一部分 伯氏疏螺旋体诱导大鼠类风湿关节炎模型的建立6-41
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符号说明12-13
• 研究背景13-16
• 材料与方法16-23
• 结果23-30
• 讨论30-33
• 结论33-34
• 参考文献34-39
• 附图39-41
• 第二部分 类风湿关节炎与TNFAIP3基因多态性关联研究的Meta分析41-61
• 中文摘要41-43
• 英文摘要43-45
• 符号说明45-46
• 研究背景46-48
• 资料与方法48-49
• 结果49-52
• 讨论52-54
• 结论54-55
• 参考文献55-59
• 附表59-61
• 致谢61-62
• 攻读学位期间成果62-63
• 学位论文评阅和答辩情况63

【参考文献】

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1 宝福凯;柳爱华;马海滨;吴娜;;莱姆关节炎发病机理研究进展[J];中国病原生物学杂志;2009年05期

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本文编号：654071