γ-氨基丁酸受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性研究

发布时间：2017-08-28 14:28

  本文关键词：γ-氨基丁酸受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性研究

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【摘要】：目的以性成熟前雌性小鼠卵巢上不同成熟度的颗粒细胞为研究对象,测定γ-氨基丁酸(GABA)及其A型受体在小鼠颗粒细胞上的表达水平,探讨γ-氨基丁酸A型受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性。方法为刺激性成熟前雌性小鼠卵泡的生长,给予其腹腔内注射孕马血清促性腺激素(PMSG),并给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)以诱发排卵,收集生发泡期(GV)和减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞周围的颗粒细胞。采用q RT-PCR技术,检测γ-氨基丁酸A型受体各个亚单位在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的基因表达;采用Western blotting和组织免疫荧光技术,检测在GV期和MⅡ期颗粒细胞中A型受体α5亚基蛋白的表达;采用免疫组织化学技术,检测GABA在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的表达及分布。结果(1)γ-氨基丁酸A型受体中α3、α5、β3、π、θ、δ亚基m RNA,均在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞中均有所表达,其中α3、π、δ亚基m RNA在GV期颗粒细胞中的表达水平高于其MⅡ期,而β3、α5亚基在GV期的颗粒细胞中表达水平低于其MⅡ期,θ亚基在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的表达几乎没有差异(P0.05)(2)A型受体α4亚基仅在小鼠GV期的颗粒细胞上有少量表达,而在MⅡ期不表达,其余的A型受体α1、α2、α6、β1、β2、γ1、γ2、γ3、ε亚单位在GV期和MⅡ期颗粒细胞中均不表达(3)A型受体α5亚基蛋白在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,且其表达量随卵泡发育呈上调趋势(P0.05)(4)根据免疫组化分析,在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞胞质中均可见GABA的分布。结论GABA及其A型受体亚单位表达于小鼠不同成熟度的颗粒细胞中,其中部分A型受体α3、α5、β3、π、δ亚单位的表达变化与卵母细胞的成熟度有相关性,提示其可能参与小鼠卵泡发育和成熟的过程。
【关键词】：γ-氨基丁酸(GABA) 受体 颗粒细胞 卵泡发育 小鼠
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R321
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-7
• 第1章 实验材料7-10
• 1.1 实验动物7
• 1.2 主要试剂7
• 1.3 主要实验仪器7-8
• 1.4 主要溶液及配方8-10
• 第2章 实验方法10-19
• 2.1 样本收集10
• 2.2 GABAA受体亚单位基因表达的检测10-14
• 2.2.1 总RNA的提取10-11
• 2.2.2 RNA的逆转录11-12
• 2.2.3 引物设计12-13
• 2.2.4 qRT-PCR反应13-14
• 2.2.5 数据分析14
• 2.3 蛋白免疫印迹法14-17
• 2.3.1 蛋白提取14
• 2.3.2 蛋白测定与处理14-15
• 2.3.3 SDS-PAGE电泳15-16
• 2.3.4 免疫印迹杂交16-17
• 2.4 组织免疫荧光检测17-18
• 2.4.1 石蜡切片制作17
• 2.4.2 组织免疫荧光17-18
• 2.5.免疫组织化学检测18
• 2.5.1 石蜡包埋及脱蜡18
• 2.5.2 免疫组织化学18
• 2.6 统计学处理18-19
• 第3章 实验结果19-30
• 3.1 GABA-A型受体亚单位在小鼠不同时期颗粒细胞上的基因表达19-28
• 3.2 免疫印迹法检测α 5 蛋白在小鼠不同时期颗粒细胞上的表达28
• 3.3 组织免疫荧光技术检测 α5 蛋白在小鼠不同时期颗粒细胞上表达28-29
• 3.4 免疫组织化学定性检测GABA在小鼠不同时期颗粒细胞上的表达29-30
• 第4章 讨论30-33
• 结论33-34
• 参考文献34-36
• 综述36-44
• 参考文献41-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 致谢45-46

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本文编号：748092