云南省部分鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌的分离及其病原学研究

发布时间：2017-08-29 00:34

  本文关键词：云南省部分鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌的分离及其病原学研究

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【摘要】：目的:了解小肠结肠炎耶尔森菌在云南鼠疫疫源地中的流行、分布情况;了解所分离到的小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特征;初步探索云南鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌与鼠疫耶尔森菌之间的存在关系。方法:1.样本来源:共选取3个云南野鼠鼠疫疫源地区及2个家鼠鼠疫疫源地区,采用鼠铗法进行捕鼠,每个地区捕鼠量不少于300只;同时采集部分指示动物肛拭子。2.PCR初筛:取捕获鼠及自毙鼠舌根及结盲肠部以及犬类肛门拭子加入到10ml改良磷酸盐缓冲液(PBS)中,4℃冷增菌21天后,提取DNA进行foxA基因的PCR筛选。3.细菌初筛:将上述PCR阳性标本接种在CIN琼脂平板上,经25℃,24~48h培养后,挑取可疑菌落对其进行foxA、ail及inv基因的菌落PCR初筛。4.生化鉴定及生物分型:上述菌落PCR阳性菌用Api 20E生化条进行鉴定。生物分型中1A型大部分为不致病菌株,故先将疑似菌落接种于胆盐-七叶苷平板,置25℃,24h判断结果。5.毒力相关基因检测:对毒力基因ystA、ystB、yadA、virF及rbfc进行检测。6.血清分型:对符合生化结果及六个毒力基因PCR结果阳性菌株用玻片凝集法对其进行O:3、O:5、O:8、O:9等四个血清分型,同时做生理盐水凝集实验对照。7.对致病菌株及特殊菌株进行进一步鉴定。8.对实验结果进行统计分析。结果:1.云南鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分离情况云南省5个县共计采集样品4853份,初筛foxa阳性菌株464份,生化鉴定为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株为266份,初筛阳性率为9.56%,分离率为5.48%。其中玉龙县采集样品1370份,初筛foxa阳性菌株274份,生化鉴定为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株为164份,初筛阳性率为19.56%,分离率为11.97%;丽江古城区采集样品782份,初筛foxa阳性菌株57份,生化鉴定为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株为17份,初筛阳性率为7.92%,分离率为2.17%;剑川县采集样品1621份,初筛foxa阳性菌株116份,生化鉴定为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株为80份,初筛阳性率为7.16%,分离率为4.94%;德宏两县采集样品610份,初筛foxa阳性菌株12份,生化鉴定为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株为1份,初筛阳性率为6.64%,分离率为0.16%;丽江犬类标本470初筛foxa阳性菌株5份,生化鉴定为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株为4份,初筛阳性率为1.06%,分离率为0.85%。2.所得小肠结肠炎耶尔森菌中携带毒力基因的菌株所有样品中携带毒力基因的菌株为182株菌,包含5种型别,其中(ail+、ysta-、ystb-、yada-、virf-、rbfc-)1株,(ail+、ysta-、ystb+、yada-、virf-、rbfc-)10株,(ail+、ysta+、ystb-、yada+、virf+、rbfc+)2株,(ail-、ysta-、ystb+、yada-、virf-、rbfc-)169株,(ail-、ysta-、ystb-、yada-、virf-、rbfc-)84株。3.所得小肠结肠炎耶尔森菌的生物型共包含7种生物/血清型别,其中1a/o:3型2株,3/o:3型2株,1a/o:8型4株,1a/o:9型14株,1a/o:5型6株,非生物1a血清未定型别4株,生物1a血清未定型234株。4.含致病毒力基因菌株的pfge分子分型对含有致病毒力基因的菌株进行pfge分子分型,可将该12个致病菌株分为3大类,3株丽江玉龙鼠类标本o:9血清型为一类,2株丽江玉龙犬类肛门拭子o:3血清型为第二类,3株剑川县鼠类标本和1株丽江玉龙县鼠类标本的o:9血清型为第三类。5.云南鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的流行病学分析经spss17.0统计分析可得各地小肠结肠炎耶尔森菌分离率不全相同(c2=182.484,P0.001);其中丽江玉龙县分离率高于丽江古城区(c2=62.027,P0.001);丽江玉龙县分离率高于剑川县(c2=49.054,P0.001);丽江玉龙县分离率高于德宏两县(c2=78.286,P0.001);丽江玉龙县分离率高于丽江犬类标本(c2=52.153,P0.001);丽江古城区分离率低于剑川县(c2=10.383,P=0.01);丽江古城区分离率高于德宏两县(11.053,P=0.001);丽江古城区分离率与丽江犬类标本比较差异不具有统计学意义(c2=3.115,P=0.11);剑川县分离率高于德宏两县(c2=29.338,P0.001);剑川县分离率高于丽江犬类标本(c2=15.762,P0.001);德宏两县分离率与丽江犬类标本比较差异不具有统计学意义(c2=2.786,P=0.095)。结论:云南省鼠疫疫源地中广泛存在着小肠结肠炎耶尔森菌,其中云南省野鼠型鼠疫疫源地分离率在10%左右,显著高于云南家鼠鼠疫疫源地不足1%的分离率;云南省鼠疫疫源地中的小肠结肠炎耶尔森以生物1A型为主,包括O:3、O:5、O:8、O:9等血清型,基因型以“ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-、rbfc-”为主,“ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-、rbfc-”为辅。
【关键词】：小肠结肠炎耶尔森菌 鼠疫疫源地 分离鉴定 病原学研究
【学位授予单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R378
【目录】：

• 英文缩略词4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 技术路线14-15
• 材料和方法15-31
• 实验结果31-46
• 讨论46-49
• 结论49-50
• 参考文献50-53
• 综述53-63
• 参考文献59-63
• 附录63-75
• 致谢75

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本文编号：750406