产肠毒素性大肠埃希菌K99-987P-F41原核表达载体的构建、表达及其纯化

发布时间：2017-08-31 17:41

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【摘要】：目的构建产肠毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41原核表达载体,诱导表达后进行纯化。方法利用PCR技术,从ETEC基因组DNA中扩增出K99、987P、F41部分基因片段,将3段目的基因融合亚克隆至大肠埃希菌原核表达载体p ET30a(+),构建重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化。结果重组表达质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41经PCR、酶切及测序鉴定证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约60 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的63.8%,纯度为81.2%,浓度为8.953 mg/ml,可同时被天然和重组抗原多抗识别,具有良好的反应原性。结论 ETEC重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41可在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍离子亲和层析柱纯化可获得融合蛋白。
【作者单位】： 黑龙江八一农垦大学食品学院;
【关键词】： 产肠毒素性大肠埃希菌 原核表达 纯化
【基金】：黑龙江省农垦总局攻关项目(HNK125B-11-02)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 产肠毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic Esche-richia coli,ETEC)是犊牛腹泻最重要的病原之一[1-2]。ETEC的毒力因子包括黏附素(也称菌毛)和肠毒素。黏附素特异性地与宿主小肠黏膜上皮细胞的特异性受体结合,进而定植于小肠黏膜,分泌肠毒素,使小肠黏膜细胞分泌功能增强,吸收功

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本文编号：766991