埃博拉病毒GP和VP40蛋白在哺乳动物细胞中的共表达及病毒样颗粒装配

发布时间：2017-09-01 12:12

  本文关键词：埃博拉病毒GP和VP40蛋白在哺乳动物细胞中的共表达及病毒样颗粒装配

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【摘要】：目的:制备基因重组埃博拉病毒样颗粒,为疫苗研究及埃博拉病毒特异抗原、抗体检测提供基础。方法:根据埃博拉病毒扎伊尔株的GP和VP40蛋白氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成GP和VP40基因片段并分别构建于表达质粒pcDNA3.1或同时构建到具有双表达单元的质粒pBudCE4.1;重组质粒经lipofectamine2000转染293FT细胞;以Western blot检测重组蛋白GP和VP40的表达;通过电镜观察病毒样颗粒。结果:构建的重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功;Western blot结果显示,共转染分别表达GP和VP40的两个质粒或转染共表达两个蛋白的质粒都发现GP特异反应条带产生,且大小与预期相符,此外,转染共表达质粒产生的GP蛋白表达明显强于两个质粒共转染,并同时可检测到VP40的表达;电镜观察到典型的丝状的埃博拉病毒样颗粒。结论:在293FT细胞中基因优化的埃博拉病毒GP和VP40可有效表达并装配为病毒样颗粒,为进一步研究奠定了基础。
【作者单位】： 昆明医科大学;中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所;云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心;
【关键词】： 埃博拉病毒 病毒样颗粒 FT细胞 表达
【基金】：中国医学科学院医学生物学研究所所级科技计划(2014IMB02ZD)对本研究的资助
【分类号】：R373
【正文快照】： 埃博拉病毒感染可引起多发性器官衰竭等症状最终导致死亡[1],致死率高达70%~80%[2]。埃博拉病毒自1967年首次发现以来已引起多次爆发[3],最近一次发生于2014年,死亡人数高达7 373人。目前来看,埃博拉病毒感染存在一定地域限制性[4],但是由于其潜伏期通常为5~12天甚至可达21天,

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本文编号：772010