刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶的原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-09-06 15:01

  本文关键词：刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶的原核表达及其多克隆抗体的制备

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【摘要】：目的原核表达、纯化刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)ME49株AP核酸内切酶,并制备多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增出刚地弓形虫ME49株DNA TGME49-216600(681bp)基因。将该片段分别插入到pET-28a和pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pET-28a-TGME49-216600和pGEX-4T-1-TGME49-216600并测序,转入大肠埃希菌BL21-CodonPlus后用IPTG诱导表达重组蛋白质。用His标签重组蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测抗体效价;采用Western blot方法分析抗体特异性。结果 SDS-PAGE分析表达的His标签重组蛋白质分子质量单位约为35ku,GST标签重组蛋白质分子质量单位约为55ku。间接ELISA方法检测制备的兔抗His标签重组蛋白抗体效价1∶16 000,Western blot方法验证显示该抗体能识别天然AP核酸内切酶。结论成功构建了TGME49-216600的表达载体,制备的多克隆抗体具有特异性,为刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶功能的研究奠定了基础。
【作者单位】： 吉林大学人兽共患病研究所;
【关键词】： 刚地弓形虫 AP核酸内切酶 原核表达 多克隆抗体
【分类号】：R382.5
【正文快照】： *刚地弓形虫是一种顶复门寄生原虫,可感染人和哺乳动物。刚地弓形虫按其毒力的不同可以分为3个虫株:TypeⅠ、TypeⅡ和TypeⅢ。TypeⅡ为弱毒株,是人类感染主要虫株类型,其中较为常见的是ME49株。刚地弓形虫病是一种在世界范围内流行的典型的人兽共患病,约有1/3人感染[1]。健康，

本文编号：803797