IL-33调节中性粒细胞抗金黄色葡萄球菌感染的作用研究

发布时间：2017-09-06 19:09

  本文关键词：IL-33调节中性粒细胞抗金黄色葡萄球菌感染的作用研究

  更多相关文章： IL-33 耐药性金黄色葡萄球菌 中性粒细胞 中性粒细胞胞外诱捕网

【摘要】：金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌,是引起全球院内感染的重要致病菌。近年来,由于抗生素的滥用,导致多重耐药性金黄色葡萄球菌产生,其致病性不断提高,病死率逐年增加。中性粒细胞作为机体固有免疫系统的重要成员,处于机体抵抗病原微生物入侵,特别是化脓性细菌感染的第一道防线。IL-33是近年来发现的一种具有多种生物学功能活性的细胞因子,在感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病中发挥重要的调节作用。本课题拟建立多重耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)感染小鼠模型,研究IL-33在抗感染免疫中的调节作用,并探讨其相关的免疫学机制,为临床上治疗MRSA感染提供新的思路和方向。研究目的:观察IL-33在小鼠MRSA感染模型中的免疫调节作用,并探讨其在抗感染免疫中相关机制;同时结合体外实验,进一步研究IL-33对中性粒细胞杀菌机制的影响,可望阐明抗感染免疫机制及防治多重耐药菌感染提供新的实验依据。研究方法:建立MRSA感染小鼠腹腔与皮肤两种模型,通过给予外源性IL-33处理,观察小鼠死亡率及感染伤口的愈合时间和愈合率,初步判断IL-33的治疗效果。取腹腔感染小鼠血液和腹腔液检测中性粒细胞数目变化,细胞因子水平及细菌分布情况;感染皮肤组织固定切片,组织病理学分析,观察伤口局部新生血管与肉芽组织生成、细菌的负荷量及皮肤感染部位NETs形成。流式细胞术及免疫荧光检测IL-33调节中性粒细胞的杀菌机制。研究结果:1.IL-33对MRSA腹腔感染的保护作用建立小鼠腹腔感染模型,经IL-33治疗后,小鼠的摄食量明显改善,活动增多,反应也较灵敏,小鼠存活率明显增高;外周血及腹腔液中性粒细胞数目升高;外周血、腹腔液及脏器中细菌负荷量降低;同时炎性细胞因子IL-6、IL-17A和TNF-α水平升高。2.IL-33对MRSA皮肤感染的保护作用建立小鼠皮肤感染模型,经IL-33治疗后,皮肤脓肿愈合时间缩短为14天,感染皮肤组织细菌负荷量减少,脓肿部位NETs生成增多。3.IL-33对中性粒细胞杀菌机制的影响IL-33预处理后,中性粒细胞的趋化、吞噬、杀伤功能增加;中性粒细胞呼吸爆发和粘附分子表达增加;PI3K/AKT/m TOR信号通路活化增强;促进中性粒细胞的胞外诱捕网(NETs)生成。结论:IL-33通过多途径调节中性粒细胞生物学活性,增强机体抗MRSA感染的免疫功能。
【关键词】：IL-33 耐药性金黄色葡萄球菌 中性粒细胞 中性粒细胞胞外诱捕网
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一章 序言11-14
• 第二章 IL-33 免疫调节MRSA腹腔感染的作用14-25
• 2.1 前言14
• 2.2 实验材料14-16
• 2.2.1 主要实验材料14
• 2.2.2 主要试剂14-15
• 2.2.3 主要仪器设备15
• 2.2.4 主要溶液配制15-16
• 2.3 实验方法16-19
• 2.3.1 金黄色葡萄球菌（MRSA）的培养16
• 2.3.2 腹腔感染模型的建立16
• 2.3.3 IL-33 处理16
• 2.3.4 小鼠死亡曲线16-17
• 2.3.5 感染后小鼠的处理17-18
• 2.3.6 ELISA检测炎性细胞因子表达18-19
• 2.3.7 IL-33 在中性粒细胞清除后腹腔感染中的作用19
• 2.3.8 统计分析19
• 2.4 实验结果19-23
• 2.4.1 小鼠存活率变化19-20
• 2.4.2 血液、腹腔液及脏器细菌负荷量20-21
• 2.4.3 血液与腹腔液中性粒细胞数目21
• 2.4.4 外周血及腹腔液中炎性细胞因子的表达21-22
• 2.4.5 IL-33 免疫调节呈中性粒细胞依赖性22-23
• 2.5 讨论23-25
• 第三章 IL-33 对中性粒细胞功能的影响25-38
• 3.1 前言25
• 3.2 实验材料25-27
• 3.2.1 主要实验材料25
• 3.2.2 主要试剂25-26
• 3.2.3 主要仪器设备26
• 3.2.4 主要溶液配制26-27
• 3.3 实验方法27-32
• 3.3.1 金黄色葡萄球菌（MRSA）的培养（同第二章）27
• 3.3.2 中性粒细胞分离（不连续的密度梯度骨髓- Percoll离心法）27-28
• 3.3.3 Transwell检测中性粒细胞趋化功能28
• 3.3.4 流式细胞术检测中性粒细胞吞噬功能28-29
• 3.3.5 溶细胞法检测中性粒细胞的杀菌功能29
• 3.3.6 流式细胞术检测中性粒细胞趋化因子CXCR2 或粘附分子CD11b的表达29-30
• 3.3.7 流式细胞术检测中性粒细胞的呼吸爆发30
• 3.3.8 流式细胞术检测p-AKT和p-mTOR表达30-31
• 3.3.9 mTOR信号对中性粒细胞杀菌功能的影响31-32
• 3.3.10 统计分析32
• 3.4 实验结果32-36
• 3.4.1 IL-33 对中性粒细胞趋化功能的影响32-33
• 3.4.2 IL-33 对中性粒细胞吞噬功能的影响33
• 3.4.3 IL-33 对中性粒细胞杀菌功能的影响33-34
• 3.4.4 流式细胞术检测IL-33 对中性粒细胞呼吸爆发的影响34
• 3.4.5 流式细胞术检测IL-33 对中性粒细胞粘附分子CD11b表达的影响34-35
• 3.4.6 mTOR信号调控中性粒细胞杀菌35-36
• 3.5 讨论36-38
• 第四章 IL-33 参与抗MRSA皮肤感染的作用38-49
• 4.1 前言38
• 4.2 实验材料38-40
• 4.2.1 主要实验材料38
• 4.2.2 主要试剂38-39
• 4.2.3 主要仪器设备39
• 4.2.4 主要溶液配制39-40
• 4.3 实验方法40-44
• 4.3.1 皮肤感染模型建立40
• 4.3.2 给药方法40
• 4.3.3 组织切片HE染色、革兰氏染色和免疫组织化学40-42
• 4.3.4 小鼠皮肤脓肿部位IL-33 的表达42-43
• 4.3.5 统计分析43-44
• 4.4 实验结果44-48
• 4.4.1 小鼠皮肤脓肿部位IL-33 的表达44
• 4.4.2 小鼠背部皮肤脓肿溃烂面积和愈合时间44-45
• 4.4.3 伤口组织切片HE染色、革兰氏染色45-47
• 4.4.4 小鼠皮肤感染伤口局部NETs的形成47-48
• 4.5 讨论48-49
• 第五章 IL-33 调控中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）杀菌作用49-60
• 5.1 前言49
• 5.2 实验材料49-51
• 5.2.1 主要实验材料49
• 5.2.2 主要试剂49
• 5.2.3 主要仪器设备49-50
• 5.2.4 主要溶液配制50-51
• 5.3 实验方法51-54
• 5.3.1 金黄色葡萄球菌（MRSA）的培养（同第二章）51
• 5.3.2 中性粒细胞分离（同第三章）51
• 5.3.3 MRSA促进中性粒细胞表达IL-3351
• 5.3.4 不同浓度的IL-33 对MRSA诱导NETs生成和杀菌率的影响51-52
• 5.3.5 检测无NETs作用下，IL-33 对MRSA诱导NETs生成和杀菌率的影响52-53
• 5.3.6 检测ROS被抑制时，IL-33 对MRSA诱导NETs生成和杀菌率的影响53-54
• 5.3.7 NETs免疫荧光染色54
• 5.3.8 统计分析54
• 5.4 实验结果54-58
• 5.4.1 MRSA促进中性粒细胞表达IL-3354-55
• 5.4.2 IL-33 对MRSA诱导NETs生成和杀菌率的影响55-56
• 5.4.3 DNA酶（DNaseⅠ）对NETs生成和杀菌率的影响56-57
• 5.4.4 ROS抑制剂（DPI）对NETs生成和杀菌率的影响57-58
• 5.5 讨论58-60
• 全文总结60-61
• 参考文献61-65
• 已发表综述65-74
• 参考文献71-74
• 附录1 英文缩写语中文对照74-76
• 附录2 攻读学位期间发表的论文76-77
• 致谢77

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 许姣;刘超;郑金旭;吴立艳;朱勤;;IL-33在肺纤维化小鼠的表达[J];江苏医药;2013年04期

，

本文编号：804914