铜绿假单胞菌碱性蛋白酶AprA及其抑制剂AprI的表达、纯化和初步的活性验证

发布时间：2017-09-08 02:28

  本文关键词：铜绿假单胞菌碱性蛋白酶AprA及其抑制剂AprI的表达、纯化和初步的活性验证

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【摘要】：目的利用大肠杆菌BL21(DE3)重组表达铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAE)重要毒力因子碱性蛋白酶(AprA)、碱性蛋白酶抑制剂(AprI)和鞭毛蛋白(flagellin),并检测AprA和AprI的生物学活性。方法以该菌PAO1的基因组为模板,PCR扩增apr A、apr I和flic基因,构建重组表达载体p ET-28a-AprA、p ET-28a-AprI和p ET-28a-鞭毛蛋白,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,将包涵体变性、复性后纯化获得AprA蛋白,通过镍亲和树脂纯化获得AprI和鞭毛蛋白。利用SDS-PAGE检测AprA裂解鞭毛蛋白活性。结果重组蛋白AprA以包涵体的形式表达,AprI和鞭毛蛋白以可溶性形式表达。AprA能裂解鞭毛蛋白,加入AprI可抑制AprA裂解鞭毛蛋白。结论 PAE分泌的AprA蛋白具有裂解鞭毛蛋白的活性,该活性能被AprI抑制。该研究为深入研究PAE的AprA的致病机制奠定了基础。
【作者单位】： 河南大学医学院;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室;
【关键词】： 铜绿假单胞菌 碱性蛋白酶 碱性蛋白酶抑制剂 鞭毛蛋白
【分类号】：R378.991
【正文快照】： 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,PAE)为自然界中广泛存在的革兰阴性细菌,是临床上常见的条件致病菌,可引发机体任何组织和部位的感染,以烧伤创伤、中耳、角膜、尿道和呼吸道最为常见,尤其是引起囊性纤维化患者的肺部感染,是主要的院内感染病原菌之一[1~3]。PAE的致病性与其产生的

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