人NEDD8原核表达及兔高免血清制备

发布时间：2017-09-09 04:49

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【摘要】：本研究根据基因比对,将合成的nedd8基因(HN8)酶切克隆入p Cold-TF原核表达载体中,命名为p Cold-HN8,转化到感受态宿主菌BL21(DE3)中,加入不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃中诱导表达24 h,超声波裂解,通过His-bind纯化试剂盒纯化,分别进行SDS-PAGE检测,结果 HN8蛋白获得可溶性表达,融合蛋白大小为64 k Da。用纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,经Western Blot和间接免疫荧光试验证实,兔抗HN8蛋白的血清能够特异性识别HN8蛋白。这为进一步研究HN8蛋白在Neddylation通路中的修饰作用奠定了基础。
【作者单位】： 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院吴泾分院内分泌科;中国农业科学院上海兽医研究所;
【关键词】： 人 NEDD 原核表达 多抗
【基金】：国家自然基金面上项目(No.31572502)
【分类号】：R392
【正文快照】： 泛素化(Ubiquitination)是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式。其修饰分子为小分子蛋白——泛素(Ubiquitin)。除泛素化修饰外,类泛素修饰也在真核细胞中发挥重要作用[1]。这两种修饰系统已被证实参与几乎所有细胞内的调控过程,如免疫识别、信号传导、细胞增殖与分化、炎症、抗原

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