过表达及定点突变缝隙连接蛋白Cx43小鼠黑色素瘤细胞模型的构建

发布时间：2017-10-10 05:18

  本文关键词：过表达及定点突变缝隙连接蛋白Cx43小鼠黑色素瘤细胞模型的构建

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【摘要】：目的构建小鼠黑色素瘤细胞(B16)过表达野生型及点突变型缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)细胞模型,为以缝隙连接(Gap Junction,GJ)为靶点的中药复方、中药单药及药物单体的研究提供可靠阳性对照和阴性对照。方法构建野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒,用定点突变技术获得Cx43G21R和Cx43G138R突变体,对上述3种质粒进行双酶切和测序鉴定,并分别包装病毒感染B16细胞,使B16细胞过表达野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R。Western blot检测Cx43蛋白表达水平变化,荧光示踪法观察缝隙连接通讯(Gap Junction Intercellular Communication,GJIC)功能变化。结果①酶切及测序证明,成功构建pLVCx43-mCherry、pLVCx43-mCherryG21R、pLVCx43-mCherryG138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒。②成功感染B16细胞并筛选稳定过表达Cx43、Cx43G21R、Cx43G138R细胞株,Western blot检测显示上述细胞株Cx43蛋白表达均高于对照组。③过表达野生型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组增强;过表达突变型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组减弱。结论过表达野生型Cx43可增强B16细胞GJIC功能,过表达突变型Cx43可抑制B16细胞GJIC功能。
【作者单位】： 广州中医药大学基础医学院;
【关键词】： 黑色素瘤细胞 小鼠 缝隙连接蛋白 定点突变 慢病毒载体 缝隙连接通讯
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81072906,30973811)
【分类号】：R273;R-332
【正文快照】： 大多数肿瘤组织中存在缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)表达和功能异常[1-5],这将影响肿瘤自杀基因疗法的旁杀伤效应。增强缝隙连接通讯(Gap JunctionIntercellular Communication,GJIC)功能是肿瘤自杀基因疗法增效的主要机制之一[6-10],也成为了肿瘤自杀基因疗法增效的作用靶点。Cx

【参考文献】

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【共引文献】

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【相似文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 王桂萍;中国少数民族基因组DNA样本库建立和CYP2C9在维吾尔族中的遗传多态性分布规律[D];中央民族大学;2012年

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本文编号：1004547