利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白

发布时间：2017-10-11 12:11

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【摘要】：目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所;云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心;
【关键词】： 翻译延伸因子-α 启动子 毕赤酵母 绿色荧光蛋白 人乳头瘤病毒 L蛋白
【基金】：云南省应用基础研究面上项目(2010ZC232) 中央高校基本科研业务费(2012N08)
【分类号】：R373.9
【正文快照】： 人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染导致的宫颈癌是危害妇女健康的第二大疾病,全世界范围内每年可致274 000妇女死亡[1]。由于70%~80%的宫颈癌与高危型HPV16和HPV18感染有关,目前的疫苗主要针对这两个基因型。HPV不能体外培养,国际上已有的疫苗是基因重组HPV主要衣

【共引文献】

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本文编号：1012444