弓形虫抗原基因真核表达质粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4的构建

发布时间：2017-10-14 18:41

  本文关键词：弓形虫抗原基因真核表达质粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4的构建

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【摘要】：目的构建弓形虫抗原基因真核表达质粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4。方法根据弓形虫RH标准株SAG1和SAG4基因序列分别设计一对特异引物(分别含有HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ内切酶位点),PCR扩增目的基因,并将这两段基因分别克隆至PEGM-T Easy载体,经菌落PCR和双酶切鉴定;用HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ分别双酶切PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4和pVAX1,得到含内切酶位点的SAG1和SAG4基因片段,分别与pVAX1连接,构建pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4真核表达质粒,经菌落PCR和双酶切鉴定。结果PCR扩增得到目的基因SAG1和SAG4,测序结果分别与弓形虫RH标准株SAG1和SAG4基因比较,符合率均为100%。构建PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4克隆质粒和pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表达质粒,分别经菌落PCR和双酶切鉴定,显示722bp的SAG1基因片段和511bp的SAG4基因片段均插入载体PEGM-T Easy和pVAX1中。结论成功克隆了pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表达质粒,为弓形虫基因疫苗应用研究奠定了基础。
【作者单位】： 广西医科大学寄生虫学教研室;
【关键词】： 弓形虫 基因疫苗 真核表达质粒
【基金】：广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻10124001A-64)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种重要的条件致病病原体,呈世界性分布,广泛寄生于人体及其他动物的有核细胞内,可引起严重的人兽共患弓形虫病,为免疫功能抑制或缺陷者(如器官移植、恶性肿瘤及艾滋病人)致死的主要原因之一,且慢性期缓殖子的活化对免疫功能缺陷者有致命的危

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本文编号：1032613