大鼠毛囊干细胞体外培养及基因转染方法

发布时间：2017-10-18 10:36

  本文关键词：大鼠毛囊干细胞体外培养及基因转染方法

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【摘要】：目的:探讨大鼠毛囊干细胞体外培养和基因转染的方法。方法:采用组织块法分离、培养大鼠触须隆突部毛囊干细胞,经Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化后,采用碱性磷酸酶染色和细胞免疫荧光染色进行细胞鉴定,测定细胞生长曲线,并分别采用脂质体和慢病毒质粒进行毛囊干细胞基因转染。结果:经两次Ⅳ型胶原贴壁筛选后,毛囊干细胞呈克隆性生长,具有典型的干细胞生物学特征,碱性磷酸酶染色阳性,角蛋白-15、整合素-α6和整合素-β1表达均为阳性。细胞生长曲线显示毛囊干细胞在接种后第3天时出现干细胞克隆;第5天和第6天时细胞处于对数生长期。脂质体介导的毛囊干细胞基因转染率为1.55%~17.21%,中位数9.63%;慢病毒介导的毛囊干细胞基因转染率为62.14%~79.42%,中位数71.52%。结论:采用组织块法分离、培养大鼠触须隆突部毛囊干细胞,经Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化后,毛囊干细胞可保持较好的生长状态和较强的克隆形成能力,且慢病毒介导毛囊干细胞基因转染比脂质体转染更高效、稳定。
【作者单位】： 浙江省杭州市萧山区中医院;浙江中医药大学;
【关键词】： 干细胞 毛囊 细胞培养技术 转染 大鼠
【基金】：浙江省科技厅公益技术应用研究项目(2010C33133)
【分类号】：R329
【正文快照】： 压轧伤、切割伤、大面积烧伤及体表肿瘤切除等造成的皮肤大面积缺损,可导致患者严重残疾,甚至死亡。毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)是一种自我更新和体外增殖能力较强的未分化细胞,主要存在于毛囊外根鞘的隆突部[1-2]。Rochat等[3]的研究表明,体外培养的HFSCs具

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