甲型副伤寒沙门菌噬菌体的分离及其生物学特性的分析

发布时间：2017-10-19 17:45

  本文关键词：甲型副伤寒沙门菌噬菌体的分离及其生物学特性的分析

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【摘要】：目的分离甲型副伤寒沙门菌(副甲菌)噬菌体(副甲噬菌体),并分析其生物学特性。方法从昆明某医院污水中分离副甲噬菌体,并采用噬斑形成法检测其滴度;透射电镜下观察浓缩纯化后的副甲噬菌体形态;分析副甲噬菌体对不同pH(1~12)和不同温度(40、50、60、70、80℃)作用的敏感性;培养副甲菌和副甲噬菌体,以不同培养时间为横坐标,对应的噬菌体滴度为纵坐标,绘制一步生长曲线,并测定爆发量、最佳MOI及副甲菌突变率;提取副甲噬菌体基因组,酶切分析副甲噬菌体核酸,SDS-PAGE分析副甲噬菌体外壳蛋白;采用热酚法提取脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),采用苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)法提取外膜蛋白(outer membrane protein,OMP),初步分析副甲噬菌体的受体。结果在医院的污水中分离出的副甲噬菌体,经双层平板计数可见大小不一、透明的噬斑,滴度在109~1010 PFU之间,透射电镜观察可见长尾和一个头部;副甲噬菌体在pH值3~10之间滴度较高,40℃以上,随温度上升滴度明显降低,在80℃几乎无活性副甲噬菌体存在;副甲噬菌体感染潜伏期为20 min,爆发期为50 min,爆发量129,最佳MOI为0.2,副甲菌突变率为5.8×10-7~2.2×10-6;副甲噬菌体基因组的单酶切产物均可见33 bp的特异条带,SDS-PAGE分析可见4条主带;LPS、OMP能与副甲噬菌体结合,是副甲噬菌体的受体。结论副甲噬菌体为长尾噬菌体,基因组为dsDNA,大小为33 bp,最佳MOI为0.2,受体位点为LPS和OMP。
【作者单位】： 昆明理工大学医学院;成都军区昆明总医院;
【关键词】： 沙门菌 甲型副伤寒 细菌噬菌体 生物学特性
【基金】：国家自然科学基金项目(31160193) 云南省教育厅科学研究基金项目(2010Y398) 云南省应用基础研究面上项目(2010ZC055;2012FB135)
【分类号】：R378
【正文快照】： 噬菌体又称细菌病毒,是生物圈中最多的微生物,在微生物平衡及生物多态性等方面均具有重要作用。副甲菌是甲型副伤寒的病原菌,通过粪口途径传播。人群对副甲菌普遍易感,尤以儿童和青壮年发病率最高。每年全球伤寒患者约2 200万,其中由副甲菌引起的约500万[1]。在我国尤其是在广

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本文编号：1062460